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流感病毒H3N2亚型核酸检测试剂盒(荧光PCR法)反应五要素

2023-01-04

流感病毒H3N2亚型核酸检测试剂盒(荧光PCR法)反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:

①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。

②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。

③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。

⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。

⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。

⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。

引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
二甲胺盐酸盐/盐酸氨基二甲烷/盐酸二甲胺/N-甲基甲胺盐酸盐/Dimethylamine hydrochloride CP,99%, 100克 国产
二正辛胺/二辛基胺/Di-n-octylamine AR,98%,及危害环境 25毫升 国产
二苯胺/氨基二苯/N-苯基苯胺/Diphenylamine AR,99%, 100克 国产
二苯胺磺酸钡/(苯基氨基)苯磺酸钡盐/二苯胺磺酸钡/N-苯基对氨基苯磺酸钡盐/Barium diphenylamine sulfonate CP 25克 国产
二苯基联苯胺/N,N-二苯基联苯胺/N,N-二苯对苯二氨基联苯/ N,N-二苯基联苯二胺/N,N-二苯对氨基联苯/N,N-Diphenylbenzidine 特纯,97% 10克 国产/进口
三异戊胺/三(3-甲基丁基)胺/三异戊基胺/Triisoamylamine 工艺级,90% 25毫升 国产/进口
盐酸三乙胺/三乙胺盐酸盐/三乙基氯化铵/N,N-二乙基乙胺盐酸盐/氯化四乙胺/Triethylamine hydrochloride CP,99.5%, 100克 国产/进口
盐酸三甲胺/三甲胺盐酸盐/三甲基氯化铵/盐酸氨基三甲烷/Trimethylamine hydrochloride CP,98% 100克 国产/进口
三异辛胺/三异辛基胺/Triisooctylamine 工艺级 100克 国产/进口
六甲基磷酰三胺/六磷胺/三(二甲氨基)氧膦/HMPT/HMPA CP,98.5%, 100毫升 国产
2,5-二羟基苯甲酸/龙胆酸/5-羟基水杨酸/DHB BR,99% 25克 国产/进口
硼酸/Boric acid GR,99.8%, 500克 国产/进口
十水四硼酸钠/硼砂/黄月砂/月石砂/硼酸钠/Sodium tetraborate decahydrate GR,99.5%, 500克 国产/进口
无水四硼酸钠/无水硼砂/无水硼酸钠/无水四硼/酸式硼酸钠/焦硼酸钠/硼氧化钠/熔融硼砂/Sodium tetraborate decahydrate AR,99.5% 500克 国产/进口
水杨酸/柳酸/沙利西酸/撒酸/邻羟基苯甲酸/2-羟基苯甲酸/Sallcylic acid AR,99%, 250克 国产/进口
水杨酸钠/柳酸钠/邻羟基苯甲酸钠/2-羟基苯甲酸单钠盐/杨酸钠/Sodium Salicylate AR,99.5%, 250克 国产/进口
磺基水杨酸/硫柳酸/磺柳酸/5-磺基水杨酸/2-羟基-5-磺基苯甲酸/5-Sulfosalicylic acid dihydrate AR,99%, 100克 国产