空肠弯曲菌核酸检测试剂盒（荧光-PCR法）的实验安全性

空肠弯曲菌核酸检测试剂盒（荧光-PCR法）的操作需严格遵循标准化流程，以确保检测结果的准确性、可重复性和实验安全性。
一、试剂与样本储存条件
试剂保存：所有试剂于 -20℃±5℃? 避光保存，有效期12个月；
避免反复冻融：试剂和样本应按单次使用量分装，反复冻融不得超过 5次，以防活性下降；
运输要求：冷冻条件下运输，确保全程温度稳定在-20℃左右。
二、实验分区与防污染控制
严格分区操作
实验应在四个独立区域进行，防止交叉污染：
第一区：样本制备区（DNA提取）
第二区：试剂配制区（反应体系配置）
第三区：加样区（模板加入）
第四区：扩增及产物分析区（PCR仪运行）
各区应配备专用工作服、移液器和耗材，人员流动应遵循单向流程。
防污染措施
实验前后使用 10%次氯酸钠或75%酒精 擦拭台面，紫外灯照射30分钟；
扩增后反应管禁止开盖，应置于密封袋内当日清理，防止气溶胶污染；
推荐使用含UDG/dUTP防污染系统 的试剂盒，在室温下即可降解残留扩增产物。
三、试剂使用与反应体系配置
试剂准备：使用前将试剂从-20℃取出，置于冰上自然融化，避免剧烈震荡；
充分混匀：反应液需完全混匀并短暂离心，防止气泡影响加样精度；
加样规范：
使用一次性吸头，避免交叉污染；
加样后轻弹混匀，盖紧管盖，避免产生气泡；
不同批号试剂不得混合使用，必须在有效期内使用。
四、样本前处理要求
增菌培养：待测样品需在 Bolton肉汤中，于微需氧条件（5–10% O?、5–10% CO?）、42℃±1℃培养24–48小时；
pH调节：必要时测定增菌液pH值，并调整至 7.4±0.2?，以保证菌体生长状态；
对照设置：
阴性对照需参与整个DNA提取过程，用于监控环境污染；
阳性对照不需提取，直接用于扩增反应。
六、结果判读标准
实验有效性判定：
阴性对照：无Ct值或Ct > 35，否则实验无效；
阳性对照：Ct ≤ 30，否则实验无效。
样本结果判定：
Ct ≤ 35：阳性，含有空肠弯曲菌；
35 < Ct ≤ 40 且扩增曲线呈“S”型：建议复测，复测阳性则判为阳性；
Ct > 40 或无扩增曲线：阴性，不含有空肠弯曲菌或低于检测限。