?核心是控制好缓冲液、溶解方式和保存条件?，下面分步骤说清楚：
一、缓冲液选择与优化
?基础缓冲液?：推荐用 ?PBS（pH 7.2-7.4）? 或 ?TBS（pH 7.5）?，能稳定抗体结构。
?添加剂?：加 ?0.1% BSA? 或 ?0.1% Tween-20? 能减少非特异性吸附，但注意 ?叠氮钠? 可能抑制酶活性，HRP标记抗体慎用。
二、溶解操作要点
?溶解方法?：
冻干粉：用 ?灭菌双蒸水? 溶解，或加 ?50%甘油? 增强稳定性。
轻柔混匀：避免剧烈震荡，可静置10分钟再轻摇。
?分装保存?：按单次用量分装（50-100μL/管），用低吸附冻存管，-20℃短期（1-3个月）或-80℃长期（6个月以上）保存。
三、特殊抗体处理
?单克隆抗体?：适合检测单一表位，实验前需优化孵育温度（4℃或室温）。
?多克隆抗体?：适用于低表达蛋白，但需用免疫前血清做阴性对照。
四、常见问题解决
?溶解不完全?：延长静置时间或轻微涡旋，避免剧烈震荡。
?抗体沉淀?：离心后重新溶解，或检查缓冲液是否合适。
五、实验操作建议
?封闭液选择?：普通蛋白用 ?5%脱脂奶粉?（室温1小时），糖基化蛋白需注意脱脂奶粉可能引起交叉反应。
?抗原修复?：对甲醛固定组织，需抗原修复以暴露抗原决定簇。
六、保存与验证
?保存条件?：分装后-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
?活性验证?：通过ELISA或Western blot验证抗体活性和结合能力。
