天冬酰胺合成酶(AS)测试盒微量法测定原理：
AS 催化 L-天冬酰胺水解成 L-天冬氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其 酶活性。 需自备仪器和用品： 台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵、冰 和双蒸水。AS测试盒微量法操作步骤详解
1. 样本处理：取待测组织样本于预冷研钵中，加入适量双蒸水冰浴匀浆，4℃条件下12,000×g离心10分钟，取上清液作为待测酶液。
2. 反应体系配制：在微量石英比色皿或96孔板中依次加入以下试剂（以单孔为例）：
- 50 μL 缓冲液（pH 8.2 Tris-HCl）
- 10 μL 10 mM L-天冬酰胺溶液（底物）
- 20 μL 待测酶液（空白组以双蒸水替代）
混匀后37℃孵育5分钟，确保反应温度稳定。
3. 显色与测定：加入20 μL奈氏试剂终止反应，立即于可见分光光度计420 nm波长下测定吸光度（若用酶标仪，需设置参比孔扣除背景）。每隔30秒记录一次数据，持续3分钟，以吸光度变化速率反映氨的生成量。
4. 酶活计算：根据标准曲线（氨浓度梯度）将ΔA/min转换为氨生成速率，再按公式 AS活性（U/g prot）= (ΔA×V总)/(ε×d×V样×Cpr)** 计算酶活单位。其中ε为氨摩尔消光系数，d为比色皿光径，Cpr为样本蛋白浓度（需提前用BCA法测定）。
注意事项：
- 奈氏试剂含汞盐，需在通风橱中操作，废液统一回收处理。
- 反应需严格控制温度和pH，避免酶失活。
- 若样本AS活性过高，可稀释后复测，确保ΔA/min处于线性范围（0.02-0.2）。
该方法灵敏度高，适用于植物抗逆研究或肿瘤代谢机制探讨，通过微量样本即可获得稳定数据。
