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猪托克特诺病毒1型荧光定量PCR实验步骤

2022-09-19

猪托克特诺病毒1型荧光定量PCR实验步骤:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其完全溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。

注意事项:产品仅用于科研1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

ARMCX2 ARM重复X连锁蛋白ARMCX2抗体
Apg10 自噬相关蛋白10抗体
ACBD6 酰基辅酶A结合结构域蛋白6抗体
Aminoacylase 1 氨基酰化酶1抗体
Adipose Triglyceride Lipase 脂肪甘油三酯脂酶抗体
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体
Amphiregulin 双调蛋白(结肠直肠细胞源性生长因子)抗体
phospho-AQP2(Ser264) 磷酸化水通道蛋白2抗体
AXL 粘附相关激酶抗体
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 磷酸化粘附相关激酶抗体
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305) 磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-AQP2(Ser269) 磷酸化水通道蛋白2抗体
phospho-Amyloid Precursor Protein (Thr743) 磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-AKT1(Ser129) 磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-Amyloid Precursor Protein (Ser198) 磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
phospho-ATF4 (Ser245) 磷酸化活化转录因子4抗体
phospho-Androgen Receptor (Ser213) 磷酸化雄激素受体抗体
phospho-Androgen Receptor (Ser650) 磷酸化雄激素受体抗体
phospho-AKT1+2+3 (Tyr315+316+312) 磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗体
phospho-AKT1(Thr34) 磷酸化蛋白激酶B抗体