大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)RDelisa试剂盒 英文名称： Rat Bone-specific Alkphase B,ALP-B ELISA Kit 产品简称： ALP-Belisa试剂盒 英文简称： ALP-B elisa Kit 采用的全是原材料研，发灵敏性高，高效性，原装抗体，吸附均匀、吸附性好，回收利用率高、可靠性强，无效包退包换，公司提供免费代测服务，各种种属ELISA试剂盒产品齐全，质量可靠。

试验所需自备物品:

1.  酶标仪(450nm波长滤光片)

2.  高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl

3.  37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水

4.  吸水纸

大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)RDelisa试剂盒试剂配制

1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。

2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

注意事项：

1.加样：

①实验样本过多时，可分批次操作，以减少实验时间延长造成的误差；

②加酶试剂后，用吸水纸吸干孔外试剂；

大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)RDelisa试剂盒③作定量试验时，使用加样器加注试剂，并经常校正其准确性，此外，要做到一份样本一个移液头，防止交叉污染。

2.温育：

①如有两种温度，尽量使用较低的温育温度、较长反应时间的条件；

②用1个小温度计放置在板孔反应液中测量观察；

③96孔板周围孔与中心孔在温育中的热力学梯度会造成“边缘效应”，因此尽量采用水浴；

3.洗板：

①手工洗板时，拍板时要垂直，避免交叉污染，用力不能过猛，防止抗原抗体复合物脱离；

②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅，若被杂物堵塞时可用注射器针头挑出；

③为了洗涤效果好，实验室可采用机器与人工洗涤相结合的方法，在机器洗涤后再进行人工洗板1-2次，或适当增加洗板的次数；

4.显色：

ELISA试剂盒中，如以四甲基联苯胺(TMB)为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以邻苯二胺(OPD)为底物，则试剂盒提供邻苯二胺片剂或粉剂。显色反应条件为37℃或室温反应15-30 min。以邻苯二胺(OPD)为底物的试剂，要临用前30 min配制且必须避光。以四甲基联苯胺(TMB)为底物的试剂则不需避光，但A、B液应尽量避免接触金属器械。

5.判定：

读取结果要在15-30 min内完成，定性测定用肉眼判读试验结果时，反应板应水平距离白色背景10-15 cm；定量测定时用酶标仪读取结果，酶标仪不应置于阳光或强光照射下，需先预热15-30 min再进行测试。

操作步骤：

1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50μl。然后在待测样品孔先 加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7.温育：操作同 3。

8.洗涤：操作同 5。

9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.

10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止 液后 15

G蛋白偶联受体34抗体 GPR34

G蛋白偶联受体35抗体 GPR35

G蛋白偶联受体37/相关内皮素受体样受体抗体 GPR37

G蛋白偶联受体40抗体 GPR40

G蛋白偶联受体43抗体 GPR43

G蛋白偶联受体44抗体 GPR44

G蛋白偶联受体45抗体 GPR45

同源盒蛋白GSC抗体 GSC

症蛋白Gemin4抗体 Gemin 4

症蛋白Gemin5抗体 Gemin 5

症蛋白Gemin7抗体 Gemin 7

GTP结合丝裂原诱导T细胞蛋白抗体 GEM

染色体卷曲螺旋域包含蛋白1抗体 GEMC1

症蛋白Gemin6抗体 Gemin 6

磷酸化胶质纤维酸性蛋白抗体 phospho-GFAP 

自主生长因子GFI1抗体 GFI1

G蛋白偶联受体109A抗体 GPR109A

γ-衔接蛋白相关蛋白1抗体 GGA1

γ-衔接蛋白相关蛋白2抗体 GGA2

γ-衔接蛋白相关蛋白3抗体 GGA3

配子生成素抗体 GGN

γ谷氨酰转肽酶2重链抗体 GGT2 heavy chain

γ-谷氨酰转肽酶5重链抗体 GGT5 heavy chain

磷酸化GATA结合蛋白3抗体 phospho-GATA3 

磷酸化GATA结合蛋白3抗体 phospho-GATA3 

延伸因子G2抗体 GFM2

葡糖淀粉酶抗体 Glucoamylase

谷氨酰胺6-磷酸果糖转移酶抗体 GFPT1

谷胱甘肽S转移酶θ抗体 GSTT1

谷胱甘肽S转移酶θ2抗体 GSTT2

γ-谷氨酰转肽酶6抗体 GGT6

颗粒酶A抗体 GZMA/Granzyme A

颗粒酶D/B/E/N/G/F/H抗体 Granzyme D/B/E/N/G/F/H

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子3受体抗体 G-CSFR/CD114/GCSF Receptor

大鼠骨特异性碱性磷酸酶B(ALP-B)RDelisa试剂盒血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗体 GPA/GYPA/CD235a

G蛋白修补结构域蛋白3抗体 GPATCH3

G蛋白偶联受体GPR63蛋白抗体 GPR63

磷酸化珠蛋白转录因子1抗体 phospho-GATA1

G蛋白偶联受体109A抗体 GPR109A