公司有大量的优质细胞，还提供人大隐内皮细胞提取物费用的全程后期服务，可以向专业人士咨询详细的人大隐内皮细胞提取物费用细胞培养条件，冻存方法，及相关培养技术。

人大隐内皮细胞提取物费用【Human Vascular: Normal Saphenous Vein Endothelial Cell Derivatives】
 人大隐内皮细胞提取物是从人原代大隐内皮细胞提取的，人原代大隐内皮细胞从正常人大隐内皮组织制备。正常人大隐内皮组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

人大隐内皮细胞提取物费用总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。        
cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证产品的质量。        
蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。        
潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4>Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

人大隐内皮细胞提取物费用【培养指南】

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察Ⅱ型肺泡上皮细胞|细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

【细胞冻存】

人大隐内皮细胞提取物费用待细胞生长状态良好时，可进行293/HEK-293细胞|细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM条件下离心4分钟，少量保存上清液(防止细胞吸走)，加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO后进行冻存。

【复苏的原则】

快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。复旦细胞库全国各地均可发货，全国统一价格，本公司出售的所有细胞仅供科研使用。

【注意事项】

注意事项：

1. 收到人大隐内皮细胞提取物费用后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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胰岛素原抗体 Proinsulin

核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗体 ENPP1

*特异转录因子PTF1A抗体 PTF1A

蛋白酪氨酸磷酸酶PTPσ抗体 PTPRS

ETS结构域转录因子FEV抗体 Pet1

神经丛蛋白A3抗体 Plexin A3

磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗体 phospho-PTPN6(Tyr564)

神经元PAS结构域蛋白5抗体 PASD5

蛋白酪氨酸磷酸酶受体PCPTP1抗体 PCPTP1

丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶4C抗体 PPP4C

植烷酰辅酶A羟化酶2相互作用蛋白抗体 PHYHIP