乳酸含量(LA)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量 代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。
测定原理：

乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成 NADH 和 H +，H +传递给 PMS 生成的 PMSH2还原 INT 生成红色物质，在 530nm 处有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器 天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：

提取液：液体 110mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃保存。 试剂二：液体 5mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：粉剂×1 支，-20℃避光保存。临用前加入 0.6mL 蒸馏水充分溶解。 试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 6mL 蒸馏水充分溶解。 试剂五：粉剂×1 支，4℃避光保存。 标准品：液体 1mL×1 支，4℃保存。 显色液：临用前根据用量按照提取液（V）：试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（m）=1（mL)： 0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少，在棕色 瓶中配制，试剂盒中带有 4 个棕色空瓶） 
样本处理 ：
 1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于 4℃，12000g 离心 10min，取上清测定。 2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；于 4℃，12000g 离心 10min，取上清测定。 3. 血清：直接测定。 
测定操作：
 样品对照管 样品测定管 标准对照管 标准测定管 样品（μL） 10 10 标准品（μL） 10 10 H2O（μL） 60 90 60 90 试剂一（μL） 30 30 试剂二（μL） 40 40 40 40 显色液（μL） 60 60 60 60 充分混匀，于 37℃反应 30min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定 530nm 处 吸光值，分别记为 A1，A2，A3，A4，△A 样=A2-A1；△A 标= A4-A3 注意：标准对照管和标准测定管只需测定一次，每个样品测定管设一个样品对照管
计算公式：
 1. 按照蛋白含量计算 LA 含量（μmol/mg prot）= △A 样÷△A 标×C 标÷ Cpr = 2×△A 样÷△A 标÷ Cpr 2. 按照样本质量计算 LA 含量（μmol/g 鲜重）= △A 样÷△A 标×C 标÷ W = 2×△A 样÷△A 标÷ W 3. 按照细胞数量计算 LA 含量（μmol/104 cell）= △A 样÷△A 标×C 标÷ 细胞数量 = 2×△A 样÷△A 标÷ 细胞数量 4. 按照液体体积计算 LA 含量（μmol/mL）= △A 样÷△A 标×C 标 = 2×△A 样÷△A 标 C 标：标准品浓度，2mmol/L；W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL 注意事项 1. 若吸光值超过 2，请进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。 2. 检出限为 1.8μmol/L。
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