肌酸激酶(CK)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸与 ATP 之间的转 磷酰基反应，在能量运转、肌肉收缩和 ATP 再生中有重要作用，是临床诊断心脑疾病的一 个重要指标。
测定原理：

CK 催化磷酸肌酸和 ADP 生成肌酸和 ATP，己糖激酶催化 ATP 与葡萄糖形成 6-磷酸葡萄糖， 6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化 6-磷酸葡萄糖与 NADP+生成 NADPH，导致 340nm 光吸收值增加。 自备实验用品及仪器： 天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏 水。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 10mL 蒸馏水溶解。 试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。 工作液：临用前根据用量将试剂一和试剂二以 1:1 混合。使用前 37℃温育 2min。
酶液提取：
1. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 15min。 2. 血清样本：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 340nm。 2．操作表 空白管 测定管 酶液（μL） 60 工作液（μL） 150 150 H2O（μL） 150 90 混匀 ，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板中，空白 管调零，测定 340nm 的初始值 A1， 37℃ 反应 3min，分别测定 1min，2min，3min 时的吸光值 A2，计算时取平均值，△A= A2- A1。 注意：空白管只需测定一次。
计算公式：
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下 （1）按组织蛋白含量计算 酶活定义：37℃，pH7.0 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1nmolNADPH 为一个酶活单位。 CK 活性（nmol/min/ mg prot）= d A × ? ε ×V 反总÷（V 样×Cpr）= 804×△A÷Cpr （2）按组织样本质量计算： 酶活定义：37℃，pH7.0 时，每克样品 1min 内催化产生 1nmolNADPH 为一个酶活单位。 CK 活性（nmol/min/g 鲜重）= d A × ? ε ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）= 804×△A÷W （3）按血清计算：酶活定义：37℃，pH7.0 时，每升血清 1min 内催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。 CK 活性（nmol/min/L）= d A × ? ε ×V 反总÷V 样×1000= 804000×△A ε ：NADPH 微摩尔消光系数，6220 L /mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应体系 总体积，0.3mL；V 样：反应体系中样本体积，0.06mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W： 样本质量，g a．用 96 孔板计算公式如下 （1）按组织蛋白含量计算 酶活定义：37℃，pH7.0 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。 CK 活性（nmol/min/ mg prot）= d A × ? ε ×V 反总÷（V 样×Cpr）= 1608×△A÷Cpr （2）按组织样本质量计算： 酶活定义：37℃，pH7.0 时，每克样品 1min 内催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。 CK 活性（nmol/min/g 鲜重）= d A × ? ε ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）= 1608×△A÷W （3）按血清计算： 酶活定义：37℃，pH7.0 时，每升血清 1min 内催化产生 1nmol NADPH 为一个酶活单位。 CK 活性（nmol/min/L）= d A × ? ε ×V 反总÷V 样×1000= 1608000×△A ε ：NADPH 摩尔消光系数，6220 L /mol/cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 反总：反应体系 总体积，0.3mL；V 样：反应体系中样本体积，0.06mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W： 样本质量，g 注意事项： 1. 配制好的工作液 4℃稳定 7 天，请尽量配制后尽快使用。 2. 血清的 CK 不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定 24h。 3. 样品蛋白质含量需要另外测定，可选用 BCA 蛋白含量测定试剂盒进行测定。 4. OD 值大于 0.5 可用提取液适当稀释样品，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。
公司正在出售的产品：