黄嘌呤氧化酶(XOD)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

XOD（EC 1.17.3.2）催化黄嘌呤氧化生成尿酸和超氧阴离子，是活性氧主要来源之一；同时 也是核苷酸代谢的关键酶之一。XOD 主要分布于哺乳动物的心，肺，肝脏等组织中，当肝 功能受损时，XOD 大量释放到血清中，对肝损害的诊断具有特异性的意义。
测定原理：

XOD 催化黄嘌呤产生尿酸，尿酸在 290nm 下有特征吸收峰。 需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、 研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：30mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存。
酶液提取：
 1、细菌、细胞或组织样品的制备： 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、血清（浆）样品：直接检测。
测定操作：
 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 290nm，蒸馏水调零。 2、 XOD 检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入 15mL 试剂一，充分混匀，待用；现 配现用； 3、 测定前将 XOD 检测工作液在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上。 4、 准备 96 孔 UV 板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光， 检测波长小于 340nm 务必使用 UV 板）。 5、在微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中加入 10μL 样本和 250μL 工作液，立即混匀并计时， 记录 290nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算 ΔA＝A2-A1。 
计算公式：
 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、血清（浆）XOD 计算： 单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷V 样÷T=2131×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(V 样×Cpr)÷T =2131×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算： 单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（nmol/min/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷（W ×V 样÷V 样总）÷T=2131×ΔA÷W （3）按细菌或细胞密度计算： 单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷（500×V 样÷V 样总）÷T=4.26×ΔA V 反总：反应体系总体积，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×104 L/ mol /cm；d：比 色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反 应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数， 500 万。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下 1、血清（浆）XOD 计算： 单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷V 样÷T=4262×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 XOD 计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷(V 样×Cpr)÷T =4262×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算： 单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（nmol/min/g 鲜重）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷（W× V 样÷V 样总）÷T =4262×ΔA÷W （3）按细菌或细胞密度计算： 单位的定义：每一万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 尿酸定义为一个酶活力单位。 XOD（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109 ]÷（500×V 样÷V 样总）÷T=8.52×ΔA V 反总：反应体系总体积，2.6×10-4 L；ε：尿酸摩尔消光系数，1.22×104 L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总 数，500 万。
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