糖原含量测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

糖原是由葡萄糖单位构成的高分子多糖，是糖的主要的储存形式之一，主要贮存在肝和肌肉 中作为备用能量，分别称为肝糖原和肌糖原。通过糖异生转变为肝糖原或葡 萄糖。
测定原理：

蒽酮法。利用强碱性提取液提取糖原，在强酸性条件下利用蒽酮显色剂测定糖原含量。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、浓硫酸（不允 许快递）和蒸馏水。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：0.1mg/mL 的葡萄糖标准液 10mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶， 4℃保存；
提取：
1﹑细胞或细菌：收集 500~1000 万细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；加入 0.75mL 提 取液超声波破碎细菌或细胞（功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；转移至 10mL 试管中，95℃水浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔 5min 振摇试管 1 次，使充分混 匀；取出试管冷却后，用蒸馏水定容到 5ml，混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。 2﹑组织：称取 0.1~0.2g 样品，加入 0.75ml 提取液充分匀浆；转移至 10ml 试管中；95℃水 浴 20min（盖紧，防止水分散失），隔 5min 振摇试管 1 次，使充分混匀；待组织全部溶解后， 取出试管冷却后，用蒸馏水定容到 5ml，混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液待测。
测定操作：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。 2、调节水浴锅至 95℃。 3、试剂二工作液的配制：在试剂二中倒入 6mL 蒸馏水，缓慢倒入 24mL 浓硫酸，充分溶解 混匀后使用；用不完的试剂 4℃保存一周； 4、加样表（在 EP 管中反应）： 试剂（μL） 空白管 标准管 测定管 待测样本 60 试剂一 60 蒸馏水 60 试剂二 240 240 240 混匀，置 95℃水浴 10min（盖紧，防止水分散失），冷却，取 200μL 转移至微量石英比色皿 或 96 孔板中，于 620nm 波长处，分别读取空白管、标准管和测定管吸光度，分别记为 A1、 A2 和 A3。注意：1、空白管和标准管只要测一次。 2、 如果 A3-A1 大于 2，需要将样本用蒸馏水稀释，计算公式中乘以相应稀释倍数。
计算公式：
1、按照样本质量计算 糖原（mg/g 鲜重）＝1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)= 0.555×(A3-A1)÷ （A2-A1)÷W 2、按照蛋白质含量计算 糖原(mg/mg prot)＝1.11×(C 标准×V1)×(A3-A1) ÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)=0.111×(A3-A1) ÷ （A2-A1) ÷Cpr 1.11：是此法测得葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，即 111ug 糖原用蒽酮试剂显色相当于 100ug 葡萄糖用蒽酮所试剂显示的颜色；C 标准管：标准管浓度，0.1mg/mL；V1：加入反 应体系中待测样本体积，0.06mL；V2：加入提取液体积，5mL； Cpr：样本蛋白质浓度， mg/mL；W：样本鲜重，g。 注意： 检测限为 10ng/g 鲜重或 0.1ng/ mg prot
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