酸性木聚糖酶测试盒/酸性半纤维素酶测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素 酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有 效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用 于酿造和饲料工业中，ACX 一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。
测定原理：

ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与 3,5-二 硝基水杨酸发生显色反应，在 540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还 原糖量成正比，通过测定反应液在 540nm 吸光值增加速率，可计算 ACX 活力。 自备实验用品及仪器： 天平、常温离心机、震荡仪、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔 板。
试剂组成和配制：

缓冲液：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂二：液体 12mL×1 瓶，4℃避光保存。
样品处理：
新鲜土样风干，过 30-50 目筛。
测定操作：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 540nm。 2、操作表 对照管 测定管 土样（g） 0.02 0.02 缓冲液（μL） 150 100 试剂一（μL） 50 混匀，50℃震荡反应 30min，立即 90℃水浴 10min，8000g，25℃离心 10min，取上清 100μL 试剂二（μL） 100 100 混匀，90℃水浴中显色 5min，取 180μL 于微量石英比色皿/96 孔板测定 540nm 处吸光值 A， 分别记为 A 对照管、A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管。
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y = 2.5554x - 0.002 ，R 2 = 0.9983 酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量 为一个酶活单位。 S-ACX 活力（μmol/d/g 土样）= （△A+0.002）÷ 2.5554 ×V 反总×10 3÷ W÷T÷ 150 =18.78 ×（△A+0.002）÷ W V 反总：反应总体积，0.15mL；T：反应时间，1/48d；1000：1mmol/L =10 3μmol/L；150： 木糖分子量。b.用 96 孔板测定的计算公式如下 标准曲线：y = 1.2777x - 0.002 ，R 2 = 0.9983 酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每克土壤每天分解木聚糖产生 1μmol 还原糖所需的酶量 为一个酶活单位。 S-ACX 活力（μmol/d/g 土样）=（△A+0.002）÷1.2777×V 反总×10 3÷ W÷T÷ 150 = 37.56 ×（△A+0.002）÷ W V 反总：反应总体积，0.15mL；T：反应时间，1/48d；1000：1mmol/L =10 3μmol/L；150： 木糖分子量。 注意事项 1. 保证震荡反应 30min，使酶与底物充分接触。 2. 注意 90℃水浴防止爆开，以免改变反应体系。
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