铜蓝蛋白(Cp)含量测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

铜蓝蛋白是血浆的含铜蛋白，有运输铜的功能，同时具有氧化酶的活性，是细胞外液重要的 抗氧化剂。
测定原理：

铜蓝蛋白催化邻联大茴香胺二盐酸盐生成红色产物，在 540nm 处有特征吸收峰，依此可得 铜蓝蛋白活性。 自备实验用品及仪器: 研钵、冰、低温离心机、酶标仪、96 孔板、可调式移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 5mL 水溶解，用不完的试剂 4℃保存。
样本前处理：
 1、 血清（浆）等液体样本：直接检测。 2、 动植物组织样本：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一，进行冰浴匀浆。10000g ，4℃ 离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定操作：
 1、 酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 540nm。 2、 操作表 在 96 孔板中依次加入如下试剂 测定管 样品（μL） 10 试剂一（μL） 150 试剂二（μL） 40 混匀，30℃下测定 540nm 处吸光值。记录初始吸光值 A1 与 10min 后吸光 值 A2，ΔA=A2-A1。
计算公式：
 1、按体积计算 酶活定义:30℃条件下， 每分钟每毫升样品消耗 1nmol 底物为一个酶活单位。 CP (U/mL) =(△A÷ε÷d×V 反总) ÷V 样÷T=417×△A 2、按鲜重计算 单位定义：30℃条件下，每分钟每克样品消耗 1nmol 底物为一个酶活单位。 CP(U/g 鲜重) =(△A÷ε÷d×V 反总) ÷(W×V 样÷V 样总)÷T =417×△A÷W 3、按蛋白浓度计算 单位定义：30℃条件下，每分钟每毫克蛋白样品消耗 1nmol 底物为一个酶活单位。 CP(U/mg prot) =(△A÷ε÷d×V 反总) ÷(Cpr×V 样)÷T =417×△A÷Cpr ε：消光系数，9.6×10 -3mL/nmol/cm；d：96 孔板光径，0.5 cm；V 反总：反应体系总体积， 0.2 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液 体积，0.01 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，10min。
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