土壤几丁质酶测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨)，以及真菌类的细 胞壁中，而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解，具有抵御真菌侵染的作用，成为病害的研究热 点。
测定原理：

几丁质酶水解几丁质产生 N-乙酰氨基葡萄糖，进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物，在 585nm 处有 特征吸收峰，吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。 自备实验用品及仪器 天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿，甲苯、蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。 试剂二：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：液体 50mL×1 瓶，4℃避光保存。
样品处理：
新鲜土样风干，过 30-50 目筛。
测定操作：
对照管 测定管 土样（g） 0.2 0.2 甲苯（μL） 30 30 混匀，25℃静置 15min 蒸馏水（μL） 200 试剂一（μL） 200 混匀，37℃培养 24h 蒸馏水（μL） 400 400 4000rpm，4℃，离心 30min，取上清 300μL 于新的 EP 管中 试剂二（μL） 30 30 混匀，沸水浴 5min 试剂三（μL） 900 900 混匀，37℃显色 20min，取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿中，蒸馏水调零，测定 544nm 处吸光值， 记为 A 对照管和 A 测定管，ΔA=A 测定管-A 对照管。
计算公式：
标准曲线：y=5.2714x-0.0007，R 2 =0.9989；x 为标准品浓度（μg/mL），y 为吸光值 ΔA。 酶活性定义：37℃条件下，每克土壤每天分解几丁质产生 1μg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。 土壤几丁质酶活性（μg/d/g 土样）=（ΔA +0.0007）÷5.2714×V 反总÷W÷T×1000 = 598×（ΔA +0.0007） V 反总：反应体系总体积，0.63mL；W：样本质量，0.2g；T：反应时间，1d；1000：1mg/mL=1000μg/mL 注意事项 1． 试剂一充分混匀后再使用。
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