土壤谷氨酰胺酶(SGLS)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等动物和某些细菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和 氨，在氮素代谢中具有重要调控作用。
测定原理：

S-GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨，利用奈氏试剂检测氨增加的速率，即可计算其 酶活性。 需自备仪器和用品： 台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵、甲 苯、冰和双蒸水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，15 mL，4 ℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶， 4 ℃保存；临用前加入 50mL 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保存； 试剂三：液体×1 瓶，60 mL，常温保存； 试剂四：液体×1 瓶，5 mL，常温保存； 试剂五：液体×1 瓶，3 mL，常温保存； 试剂六：液体×1瓶，3 mL，常温避光保存。
测定操作：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 420nm，蒸馏水调零。 2、样品测定（在 EP 管中加入下列试剂）： 试剂名称 测定管 对照管 样本（g） 0.1 甲苯（uL） 25 25 振荡混匀，室温放置 15min 试剂一（uL） 100 100 试剂二（uL） 400 400 混匀，37℃水浴 2 小时 试剂三（uL） 525 525 混匀，8000 g，25℃离心 10 min；取上清液，依次加入下列试剂 上清液（uL） 130 130 试剂四（uL） 30 30 试剂五（uL） 20 20 试剂六（uL） 20 20 混匀，室温静置 15min，420nm 处读取测定管和对照管吸光值， 计算ΔA=A 测定管-A 对照管。对照管只要做一管。 注意：试剂六如出现沉淀，静置后取上清使用。
计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准条件下测定的回归方程为 y = 3.8488x+0.0057；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光 值 A。 单位定义：每 g 土样每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。 S-GLS（nmol/min/g 土样）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反总÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。 V 反总：反应体系总体积：1.05mL；T：反应时间，2h=120min；W：样本质量，g; 1000， μmol 到 nmol 换算系数。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下 标准条件下测定的回归方程为 y = 1.9244x+0.0057；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光 值 A。 单位定义：每 g 土样每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol 氨定义为一个酶活力单位。 S-GLS（nmol/min/g 土样）＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V 反总÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W。 V 反总：反应体系总体积：0.525mL；T：反应时间，2h=120min；W：样本质量，g; 1000， μmol 到 nmol 换算系数。
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