土壤β木糖苷酶( SβXYS)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的 关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂 应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。
测定原理：

S-β-XYS 催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚，对硝基苯酚在 405nm 处有特征吸收 峰，测定 405nm 光吸收增加速率，可计算 S-β-XYS 活性。 自备实验用品及仪器： 天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 1mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂二：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃保存。
提取：
 约 0.1g 鲜土或风干土样，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，室温振荡提取 30min，然后 10000g， 4℃，离心 10min，取上清待测。
测定操作：
 1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 405nm。 2、操作表 对照管 测定管 样本（μL） 40 40 试剂一（μL） 10 试剂二（μL） 80 70 混匀，45℃水浴 20min 试剂三（μL） 80 80 混匀，静置 5min，405nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一 个对照管。
计算公式：
 a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y=13.226x+0.0011，R 2 =0.9998；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值ΔA。 酶活定义：每克土样每天催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土样）=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷T =16.33×(ΔA-0.0011)÷W V 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，0.12mL；V 样：反应中样品体积， 0.04mL； W：样品质量，g；T：反应时间，20min=1/72d； b.用 96 孔板测定的计算公式如下 标准曲线：y=6.613x+0.0011，R 2 =0.9998；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值ΔA 酶活定义：每克土样每天催化产生 1μmol 对硝基苯酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性（μmol/d /g 土样）=(ΔA-0.0011) ÷6.613×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)÷TV 样总：加入提取液体积，1mL； V 反总：反应总体积，0.12mL；V 样：反应中样品体积， 0.04mL； W：样品质量，g；T：反应时间，20min=1/72d； ΔA 控制在 0.01-1 范围内，若ΔA 大于 1，可适当减小样本量。 标准曲线线性范围为：0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
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