土壤亮氨酸氨基肽酶(SLAP)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

S-LAP 是一类能水解肽链 N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP 活性变化与机 体某些病理状态密切相关。 
测定原理：

S-LAP 分解 L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在 405nm 有 吸收峰，通过测定 吸光值升高速率来计算 S-LAP 活性。 自备用品： 酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、 研钵、冰和蒸馏水。 
试剂组成和配制：

试剂一：液体 35mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；
测定操作：
 1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm，蒸馏水调零。 2、 在试剂二瓶中加入 15mL 试剂一充分溶解（如较难溶解，可 60℃水浴加热约 30min 促进 溶解）；在 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min 以上；用不完的试剂分装 后-20℃保存，禁止反复冻融。 3、 操作表 试剂名称 对照管 测定管 新鲜土样（g） 0.05 0.05 试剂一（μL） 300 试剂二（μL） 300 混匀， 37℃振荡反应 1h 后，8000g 4℃离心 10min，取 200μL 上清液于微量石英比色皿或 96 孔板中，405nm 处测定吸光值 A，计算 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照 管。 
计算公式：
 a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 单位的定义：每天每 g 土样每天生成 1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。 S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V 反总÷（ε×d）×106 ÷W÷T=14.8×ΔA V 反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d： 比色皿光径，1cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.05g。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下 单位的定义：每天每 g 土样每天生成 1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。 S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V 反总÷（ε×d）×10 6 ÷W÷T=29.6×ΔA V 反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d： 比色皿光径，0.5cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.05g。
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