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产地 | 国产 |
品牌 | 谷研 |
货号 | GOY-SH329-B |
用途 | 仅供科研实验 |
英文名称 | HR |
包装规格 | 50管/24样 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
别名 | 土壤羟胺还原酶(HR)测试盒 |
分子式 | |
是否进口 | 否 |
土壤羟胺还原酶(HR)测试盒可见分光光度法
商品属性:
检测方法 |
规格 |
货号 |
可见分光光度法 |
50管/24样 |
GOY-SH329-B |
测定意义:
土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨,土壤中的还原态化
合物可作为氢的供体,其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失,间接影响氮肥的
利用效率。
测定原理:
硫酸铁铵中的 Fe3+可将羟胺氧化为氮气,自身被还原为 Fe2+,Fe2+在弱酸条件下与邻菲罗琳
形成橙红色配合物,在 510nm 处有吸收峰,羟胺还原酶作用于羟胺,使配合物形成量减少,
510nm 处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、常温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、震荡仪、氮吹仪。
试剂组成和配制:
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 10mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。
试剂四:液体 20mL×1 瓶,4℃保存。(过饱和试剂,如有结晶析出,可 37℃水浴溶解)
试剂五:液体 10mL×1 瓶,4℃保存。
试剂六:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂七:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
样品处理:
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,过 30~50 目筛。
测定操作:
空白管 对照管 测定管
风干土样(g) 0.1 0.1
试剂一(μL) 200 200
蒸馏水(μL) 200
试剂二(μL) 200 200 200
试剂三(μL) 600 600 600
混匀后,用 N2 气流排除管中空气,立即密封,于 30℃反应 1h
试剂四(μL) 400 400 400
充分震荡 10min,8000rpm,25℃,离心 10min
上清液(μL) 100 100 100
试剂五(μL) 200 200 200
试剂六(μL) 100 100 100
试剂七(μL) 100 100 100
蒸馏水(μL) 500 500 500
充分混匀,25℃静置显色 10min,用蒸馏水调零,于 1mL 玻璃比色皿中
测定 510nm 各管吸光值,分别记为 A 空白管、A 对照管、A 测定管,△
A=A 空白管-(A 测定管-A 对照管)。
计算公式:
标准曲线:y = 0.185x -0.1828,R2 = 0.9992
酶活定义:每克土壤每天转化 1μg 羟胺为一个酶活力单位。
HR 活性(μg/d /g 土样)=(△A+ 0.1828)÷0.185×V 反总÷W÷T
= 181.62×(△A+0.1828)÷W
V 反总:加入提取液体积,1.4mL;W:样本质量,g;T:1/24h
注意事项
1. 土壤表层溶解氧浓度较大,取样应取表层 5cm 以下的土壤,否则酶活性较低或者测定不
到。
2. 试剂三尽量不要敞口放置,取完立即加盖拧紧。
3. 反应体系 能用氮吹仪排除溶解氧,若无此装置,则加入试剂三后立即密封,于 30℃
反应 1h。
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