土壤酸性蛋白酶(SACPT)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其 水解产物是高等植物的氮源之一。S-ACPT 在酸性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含 量、氮素及其他土壤性质有关。
测定原理：

酸性条件下，S-ACPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合 物生成钨蓝；在 680nm 有特征吸收峰。 所需仪器及设备： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板、 双蒸水
试剂组成和配制：

液体一：1mL×1 支，4℃保存。 液体二：0.5mL×1 支，4℃保存。 试剂一的配制：临用前按液体一：液体二：蒸馏水=140（μL）：20（μL）：21（mL）的比 例配制，现配现用，如出现白色絮状沉淀则不能用。 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 6ml 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂 4℃保存； 试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 2mL 试剂七，沸水浴加热溶解，然后加入 8ml 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂 4℃保存； 试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 30ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存； 试剂五：液体 8mL×1 瓶，4℃保存； 试剂六：液体 1.5mL×1 支，0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液，4℃保存； 试剂七：液体 5mL×1 支，4℃保存；
样品处理：
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。
测定操作：
1、 试剂一的配制：见试剂的组成和配制。 2、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。 3、样本测定： 试剂名称 测定管 对照管 风干土样（g） 0.02 0.02 试剂一（μL） 150 试剂三（μL） 150 混匀，40℃水浴 30min，振荡 5-6 次，使土样与反应液充分接触 试剂二（μL） 50 50 混匀，8000g25℃离心 10min，取上清液，在 EP 管中加入下列试剂 测定管 对照管 标准管 上清液（μL） 60 60试剂六（μL） 60 试剂四（μL） 280 280 280 试剂五（μL） 60 60 60 混匀，40℃水浴 20min，8000g 25℃离心 10min，取上清液 200μL，680nm 下读取各管吸光 值 A 注意：标准管只需测一次。每个测定管设一个对照管。
计算公式：
单位定义：每天每 g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-ACPT 活力单位。 S-ACPT(mg/d/g 土样)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=24×(A 测定管 -A 对照管)÷A 标准管 C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.2mL；T：反应时间， 30min=1/48d； W：样本质量，0.02g。
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