土壤中性蛋白酶(SNPT)测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其 水解产物是高等植物的氮源之一。S-NPT 在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、 氮素及其他土壤性质有关。 
测定原理：

中性条件下，S-NPT 可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物 生成钨蓝；在 680nm 有特征吸收峰。 实验中所需仪器及设备： 可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml 玻璃比色皿、蒸馏水
试剂组成和配制：

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 6ml 蒸馏水充分溶解；用不完的试剂 4℃保存； 试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 2mL 试剂七，沸水浴加热溶解，然后加入 8ml 试剂一，充分混匀备用，用不完的试剂 4℃保存； 试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 40ml 蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存； 试剂五：液体 10mL×1 瓶，4℃保存； 试剂六：液体 1.5mL×1 支，0.05mg/ml 标准酪氨酸溶液，4℃保存； 试剂七：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
样品处理： 
 新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干，过 30~50 目筛。
测定操作：
 1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。 2、样本测定： 试剂名称 测定管 对照管 风干土样（g） 0.04 0.04 试剂一（μL） 300 试剂三（μL） 300 混匀后，40℃水浴 30min，振荡 5-6 次，使土样与反应液充分接触 试剂二（μL） 100 100 混匀，8000g 25℃离心 10min，取上清液 测定管 对照管 标准管 上清液（μL） 150 150 试剂六（μL） 150 试剂四（μL） 700 700 700 试剂五（μL） 150 150 150 混匀，40℃水浴 20min，8000g 25℃离心 10min，取上清液 1mL，680nm 下读取各管吸光值 A
计算公式：
 S-NPT 活性计算： 单位定义：每天每 g 土样中产生 1mg 酪氨酸为一个 S-NPT 活力单位。 S-NPT(mg/d/g 土样)=C 标准×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管×V 反总÷W÷T=24×(A 测定管-A 对照管)÷A 标准管 C 标准管：标准管浓度，0.05mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.4mL；T：反应时间， 30min=1/48d； W：样本质量，0.04g。
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