维生素E测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

维生素 E（Vitamin E）是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗 氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整 性和正常功能，在医药、化妆品、保健品、食品行业 具有较高的应用价值。
测定原理：

VE 还原 Fe 3+为 Fe 2+，Fe 2+与 1,10-菲罗啉产生有色络合物，在 530nm 有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器 天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、漩涡震荡仪。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂二：液体 2mL×1 支，4℃保存。 试剂三：液体 2mL×1 支，4℃保存。 试剂四：液体 6mL×1 瓶，4℃保存。
样本处理：
1. 组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，匀浆后用提取液定至 1mL，定至在漩涡混匀仪上震荡 5min，于 25℃，5000g 离心 10min，取上层测定。 2. 细胞：按照细胞数量（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）后在漩涡混匀仪上震荡 5min，于 25℃，5000g 离心 10min，取上层测定。 3. 血清：取 0.1mL，加 0.9mL 提取液，漩涡仪混匀上震荡 5min，于 25℃，5000g 离心 10min， 取上层测定。
测定操作：
对照管 测定管 样品（μL） 100 100 试剂一（μL） 20 20 试剂二（μL） 20 试剂三（μL） 20 充分混匀，25℃反应 5min 试剂四（μL） 60 60 充分混匀，于微量石英比色皿/96 孔板，无水乙醇调零，测定 530nm 处吸光值， 记为 A 对照管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 对照管。
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y = 0.22x + 0.0065 R2 = 0.9978 1. 按照蛋白含量计算 VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反总÷（V 样×Cpr） = 9.09×（△A -0.0065）÷ Cpr 2. 按照样本质量计算VE 含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷ 0.22×V 反总÷（V 样×W÷V 样总） = 9.09×（△A -0.0065）÷ W 3. 按照细胞数量计算 VE 含量（μg/10 4 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总） = 9.09×（△A -0.0065）÷ 细胞数量 4. 按照液体体积计算 VE 含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷ 0.22×V 反总÷V 样×10 = 90.9×（△A -0.0065） V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g b. 用 96 孔板测定的计算公式如下 标准曲线：y = 0.11x + 0.0065 R 2 = 0.9978 1. 按照蛋白含量计算 VE 含量（μg/mg prot）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V 反总÷（V 样×Cpr） = 18.18×（△A -0.0065）÷ Cpr 2. 按照样本质量计算 VE 含量（μg/g）= （△A -0.0065）÷0.11×V 反总÷（V 样×W÷V 样总） = 18.18×（△A -0.0065）÷ W 3. 按照细胞数量计算 VE 含量（μg/10 4 cell）=（△A -0.0065）÷ 0.11×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总） = 18.18×（△A -0.0065）÷ 细胞数量 4. 按照液体体积计算 VE 含量（μg/mL）=（△A -0.0065）÷0.11×V 反总÷V 样×10 = 181.8×（△A -0.0065） V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：加入样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积， 1mL；Cpr：蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g 注意事项 若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
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