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| 产地 | 国产 |
| 品牌 | 谷研 |
| 货号 | GOY-SH374 |
| 用途 | 仅供科研实验 |
| 英文名称 | Ⅲ/CoQ |
| 包装规格 | 100管/96样 |
| 纯度 | % |
| CAS编号 | |
| 别名 | 线粒体呼吸链复合体Ⅲ/CoQ细胞色素C还原酶测试盒 |
| 分子式 | |
| 是否进口 | 否 |
线粒体呼吸链复合体Ⅲ/CoQ细胞色素C还原酶测试盒微量法
商品属性：
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检测方法 |
规格 |
货号 |
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微量法 |
100管/96样 |
GOY-SH374 |
测定意义：
线粒体复合体Ⅲ（EC 1.10.2.2）又称 CoQ-细胞色素 C 还原酶，广泛存在于动物、植物、微
生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责把还原
型 CoQ 的氢传递给细胞色素 C，生成还原型细胞色素 C。
测定原理：
与氧化型细胞色素 C 不同，还原型细胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收，因此 550nm 光吸收
增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：液体 20mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 1.5mL×1 支，-20℃保存；
试剂四：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂六：液体 2.5mL×1 瓶，-20℃保存；
样本的前处理：：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆
器或研钵匀浆。
2、 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅲ（此步可选
做）。
5、 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，
功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅲ酶活性测定。
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）工作液的配制：将试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其
它物种）孵育 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、25μL 试剂六和 200μL 工作液，立
即混匀，记录 550nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A2-A1。
计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力
单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(Cpr×V 样) ÷T=615×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷ （ε×d）×109
]÷(W× V 样÷V 样总)
÷T=124×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶
活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/104
cell)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.248×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2.35×10-4
L；ε：细胞色素 C 摩尔消光系数，1.91×104
L / mol /cm；
d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202 mL；
T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细胞或细
菌总数，500 万。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1 nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力
单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(V 样×Cpr) ÷T=1230×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷ （ε×d）×109
]÷(W ×V 样÷V 样总)
÷T=248×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶
活力单位。
复合体Ⅲ活力(nmol/min/104
cell)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.496×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2.35×10-4
L；ε：细胞色素 C 摩尔消光系数，1.91×104
L / mol /cm；
d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202
mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本质量，g；500：细
胞或细菌总数，500 万。
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