纤维素含量(CLL)测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖，通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起，是植物 细胞壁的主要结构成分。纤维素是一种重要的膳食纤维，是自然界中分布最广、含量 一种多糖。
测定原理：

纤维素为β－葡萄糖残基组成的多糖，在酸性条件下加热能分解成β－葡萄糖。β－葡萄糖在 强酸作用下，可脱水生成β－糠醛类化合物。β－糠醛类化合物与蒽酮脱水缩合，生成糠醛衍 生物。颜色的深浅可间接定量测定纤维素含量。 需自备的仪器和用品： 可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、80％乙醇、丙酮、浓硫酸（不 允许快递）、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体 60mL× 1 瓶，4℃保存。
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体 6mL× 1 支，4℃保存。

样品的前处理：
 1、样品 80℃烘干至恒重
【注 1】，粉碎，过 40 目筛。称取 0.01g 样本，加入 1mL 80％乙醇，
90℃水浴 20min
【注 2】，冷却至室温，8000g 25℃离心 10min，弃上清。沉淀中加入 1.5mL80％
乙醇和丙酮各清洗一遍（涡旋振荡 2min 左右，8000g 25℃离心 10min，弃上清），沉淀烘干
后即为粗细胞壁。
2、在上述粗细胞壁中加入 1mL 试剂一，充分混匀，90℃水浴 30min
【注 2】。取出冷却后 8000g
25℃离心 10min，弃上清。沉淀中加入 1mL 蒸馏水混匀，涡旋振荡 2min 左右，8000g 25℃
离心 10min，弃上清，沉淀用蒸馏水重复清洗 3 次（加入 1mL 蒸馏水混匀，涡旋振荡 2min
左右，8000g 25℃离心 10min，弃上清）。沉淀中加入 1mL 丙酮，混匀后 8000g 25℃离心 10min，
弃上清，沉淀烘干待用。
3.在上述烘干的沉淀中加入 0.5mL 蒸馏水
【注 3】，置于冰水浴中，缓慢加入 0.75mL 浓硫酸，
混匀，冰水浴中静置 30min，取部分上清液，用蒸馏水稀释 20 倍
【注 4】，8000g 4℃离心 10min，
取上清液待测。
注意事项：
【注 1】 80℃烘干的时间为 2 小时，依据样本情况可延长烘干时间。
【注 2】 90℃加热过程中 EP 管可能爆开，建议用胶带封口或使用带螺旋盖的防爆 EP 管。
【注 3】 沉淀加入 0.5mL 蒸馏水后，如果不能充分溶解，可以适当匀浆或超声促进溶解。
【注 4】 部分样本中纤维素含量较低（淀粉含量较高），如米粉、板栗、甘薯等，可不稀释
或减小稀释倍数。

测定操作：
 1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至 95 度。
3、工作液的配制：在试剂二中加入 4mL 试剂三，充分溶解，如较难溶解，可加热搅拌；用
不完的试剂 4℃保存一周；
4、加样表（在 EP 管中反应）：
试剂（μL） 空白管 测定管
样本 300
蒸馏水 300
工作液 70 70
浓硫酸 630 630
混匀，置 95 度水浴中 10min（盖紧，以防止水分散失），冷却至室温后，于 620nm 处，分
别读取空白管和测定管吸光值，ΔA=A 测定管-A 空白管。
注意：
1、空白管只要做一管。
2、由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。

计算公式：
 1、标准条件下测定的回归方程为 y = 7.875x - 0.0043；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光
值。
2、按样本质量计算：
纤维素（mg /g 干重）= [(ΔA＋0.0043) ÷7.875×V1]÷（W×V1÷V2）×20=3.17×(ΔA＋0.0043) ÷W。
V1：加入样本体积，0.3mL；V2：加入提取液体积，1.25mL；W：样本干重， 0.01g；20：
样本稀释倍数。
注意： 检测限为 1mg/g 干重或 10μg/ mg prot

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