细胞色素b5含量测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶，药物在动物体内的I相反应主要依赖细胞色素P450酶催化完成，许多药物能诱导或抑制细胞色素P450的活性，从而引起药物的 降低、中毒和残留发生率的增加。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白，其比值的变化与P450代谢活性密切相关。
测定原理：

氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后，在424nm处有 吸收峰，且在424nm-490nm的消光系数为171n/M?cm，通过测定424nm和490nm处吸光值的差异，即可计算出细胞色素b5的含量
实验中所需仪器及设备：
可见分光光度计、普通离心机，低温超速离心机、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、双蒸水和甘油。
        

试剂一?粉剂核2 瓶，4℃保存.临用前各加 100mL 蒸馏水，充?溶解.
试剂二?液体核1 瓶，4℃保存.
试剂三?粉剂核1 瓶，4℃保存.

临用前配制，戴一次性手套，小心打开试剂二瓶盖，加试剂二 20mL 充分溶解，4℃避光可保存 1 周.

提取：
 1?除去?胞?，线粒体等大?子物质??约 0.5g 组?，加入 1mL 试剂一，冰к充?研磨，
10 000g 4℃离心 30min，取к清液，转入超速离心管中。
2?粗制微粒体?100 000g，4℃离心 60min，?к清液。
3?除血红蛋白等杂质?向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一，盖紧后充?震荡溶解，100 000g离心 30min，?к清液。
4??测液?向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5mL，盖紧后充?震荡溶解，即?测液，该?测液需当天测定。

测定操作：
 1. ?光光度?/酶标仪预热 30 min?
2. 工作液置于 25℃水浴中预热 30 min?
3. 空白管?取 1mL 玻璃比色皿，加入 10 μL 蒸馏水，200μL 工作液，室温静置 2 min，424nm
和 490nm 处吸光值，424nm 处吸光值记? A 空白管 1，490nm 处吸光值记? A 空白管 2?
△A 空白管= A 空白管 1- A 空白管 2
4. 测定管?取 1mL 玻璃比色皿，加入 10 μL ?测液，200μL 工作液，室温静置 2 min，424nm
和 490nm 处吸光值，424nm 处吸光值记? A 测定管 1，490nm 处吸光值记? A 测定管 2?
△A 测定管= A 测定管 1- A 测定管 2?
注意?只需要做一个空白管?