上海谷研实业有限公司
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细胞色素b5含量测试盒微量法
  • 英文名称:b5
  • 品牌:谷研
  • 产地:国产
  • 货号:GOY-SH367
  • 价格: ¥550/盒
  • 发布日期: 2018-11-14
  • 更新日期: 2025-05-14
产品详请
产地 国产
品牌 谷研
货号 GOY-SH367
用途 仅供科研实验
英文名称 b5
包装规格 100管/96样
纯度 %
CAS编号
别名 细胞色素b5含量测试盒
分子式
是否进口

细胞色素b5含量测试盒微量法


商品属性:

检测方法

规格

货号

微量法

100管/96样

GOY-SH367

测定意义:

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。细胞色素P450和细胞色素b5是P450酶系的两个血红素蛋白,其比值的变化与P450代谢活性密切相关。
测定原理:

氧化型细胞色素b5经连二亚硫酸钠还原后,在424nm处有 吸收峰,通过测定424nm和490nm处吸光值的差异,即可计算出细胞色素b5的含量。
自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制:

试剂一?粉剂核2 瓶,4℃保存.临用前各加 100mL 蒸馏水,充?溶解.
试剂二?液体核1 瓶,4℃保存.
试剂三?粉剂核1 瓶,4℃保存.

临用前配制,戴一次性手套,小心打开试剂二瓶盖,加试剂二 20mL 充分溶解,4℃避光可保存 1 周.


提取:
 1?除去?胞?,线粒体等大?子物质??约 0.5g 组?,加入 1mL 试剂一,冰к充?研磨,
10 000g 4℃离心 30min,取к清液,转入超速离心管中。
2?粗制微粒体?100 000g,4℃离心 60min,?к清液。
3?除血红蛋白等杂质?向步骤 2 的沉淀中加 1mL 试剂一,盖紧后充?震荡溶解,100 000g离心 30min,?к清液。
4??测液?向步骤 3 的沉淀中加试剂二 0.5mL,盖紧后充?震荡溶解,即?测液,该?测液需当天测定。

测定操作:
 1. ?光光度?/酶标仪预热 30 min?
2. 工作液置于 25℃水浴中预热 30 min?
3. 空白管?取 1mL 玻璃比色皿,加入 10 μL 蒸馏水,200μL 工作液,室温静置 2 min,424nm
和 490nm 处吸光值,424nm 处吸光值记? A 空白管 1,490nm 处吸光值记? A 空白管 2?
△A 空白管= A 空白管 1- A 空白管 2
4. 测定管?取 1mL 玻璃比色皿,加入 10 μL ?测液,200μL 工作液,室温静置 2 min,424nm
和 490nm 处吸光值,424nm 处吸光值记? A 测定管 1,490nm 处吸光值记? A 测定管 2?
△A 测定管= A 测定管 1- A 测定管 2?
注意?只需要做一个空白管?

计算公式:
 a.使用微?石英比色皿测定的?算公式如л
?1?按蛋白浓度?算
?胞色素 b5 含?(nmol/mg prot) = ( A △ 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷?Cpr×V ??
 = 0.1228×( A △ 测定管-△A 空白管)÷Cpr ?2?按?本质??算
?胞色素 b5 含??nmol/g 鲜重?= ( A △ 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×?V ?总÷V ??
÷W
 = 0.0614×( A △ 测定管-△A 空白管)÷W
ε?还原型?胞色素 b5 纳摩尔消光系数,171×10-3 L/nmol/cm?d?比色皿光??cm?,1cm?
V 反总?反应体系总体?,210 μL =2.1×10-4 L?Cpr??测液蛋白质浓度?mg/mL?,需要另
外测定?V ??加入反应体系中?测液体?,10 μL=0.01 mL?V ?总??测液总体?,0.5 mL?
W??品质??g??
b.使用 96 孔板测定的?算公式如л
?1?按蛋白浓度?算
?胞色素 b5 含?(nmol/mg prot) = ( A △ 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总÷?Cpr×V ??
 = 0.2456×( A △ 测定管-△A 空白管)÷Cpr
?2?按?本质??算
?胞色素 b5 含??nmol/g 鲜重?= ( A △ 测定管-△A 空白管)÷(ε×d)×V 反总×?V ?总÷V ??
÷W
 = 0.1228×( A △ 测定管-△A 空白管)÷W
ε?还原型?胞色素 b5 纳摩尔消光系数,171核10-3 L/nmol/cm?d?96 孔板光??cm?,0.5cm?
V 反总?反应体系总体?,210 μL =2.1核10-4 L?Cpr??测液蛋白质浓度?mg/mL?,需要
另外测定?V ??加入反应体系中?测液体?,10 μL=0.01 mL?V ?总??测液总体?,
0.5 mL?W??品质??g??

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