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| 产地 | 国产 |
| 品牌 | 谷研 |
| 货号 | GOY-SH373 |
| 用途 | 仅供科研实验 |
| 英文名称 | |
| 包装规格 | 100管/96样 |
| 纯度 | % |
| CAS编号 | |
| 别名 | 线粒体呼吸链复合体Ⅱ/琥珀酸辅酶Q还原酶测试盒 |
| 分子式 | |
| 是否进口 | 否 |
线粒体呼吸链复合体Ⅱ/琥珀酸辅酶Q还原酶测试盒微量法
商品属性：
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检测方法 |
规格 |
货号 |
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微量法 |
100管/96样 |
GOY-SH373 |
测定意义：
线粒体复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶 Q 还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的
线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基 FAD 还原为 FADH2，后者进一步还原
氧化型辅酶 Q 生成还原型辅酶 Q，是呼吸电子传递链的支路。
测定原理：
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶 Q 可进一步还原 2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在 605nm
有特征吸收峰，通过检测 2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、
研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂二：液体 20mL×1 瓶，-20℃保存；
试剂三：液体 1.5mL×1 支，-20℃保存；
试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；
试剂五：粉剂×1 支，-20℃保存；
试剂六：液体 2.5mL×1 瓶，4℃保存；
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
1、 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞，加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三，用冰浴匀浆
器或研钵匀浆。
2、 将匀浆 600g，4℃离心 5min。
3、 弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心 10min。
4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅱ（此步可选
做）。
5、 步骤④中的沉淀即为线粒体，加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，
功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 秒，重复 30 次），用于复合体Ⅱ酶活性测定。
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 605nm，蒸馏水调零。
2、 样本测定
（1）工作液的配制：临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或
25℃（其它物种）孵育 5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
（2）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、25μL 试剂六和 200μL 工作液，立
即混匀，记录 605nm 处初始吸光值 A1 和 2min 后的吸光值 A2，计算 ΔA=A1-A2。
计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(V 样×Cpr) ÷T=559×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷ （ε×d）×109
]÷(W× V 样÷V 样总)
÷T=113×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/104
cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T
=0.226×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2.35×10-4
L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104
L / mol /cm；
d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202 mL；
T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细
菌总数，500 万。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下：
（1） 按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109
]÷(Cpr×V 样) ÷T=1118×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。
（2） 按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟消耗 1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷ （ε×d）×109
]÷(W ×V 样÷V 样总)
÷T=226×ΔA÷W
（3） 按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活力(nmol/min/104
cell)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109
]÷(500×V样÷V样总) ÷T=0.452×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2.35×10-4
L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104
L / mol /cm；
d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，0.202
mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞
或细菌总数，500 万。
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