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产地 | 国产 |
品牌 | 谷研 |
货号 | GOY-SH378-B |
用途 | 仅供科研实验 |
英文名称 | MCA |
包装规格 | 50管/48样 |
纯度 | % |
CAS编号 | |
别名 | 线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒 |
分子式 | |
是否进口 | 否 |
线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒紫外分光光度法
商品属性:
检测方法 |
规格 |
货号 |
紫外分光光度法 |
50管/48样 |
GOY-SH378-B |
测定意义:
CA 是线粒体三羧酸循环的 个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成,
其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。
配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量,
其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙
酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰
CoA 情况,(3)乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量变化可以反映三羧酸循环进行
状况。
测定原理:
CA 在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步
与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰,该波长下吸光度
的变化程度可反映出 CA 的含量。
自备仪器和用品:
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制:
酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 15mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃
保存。
标准品:液体 1mL×1 支,10μmol/mL 柠檬酸标准液,4℃保存。
提取:
称 0.05~0.1g 样品(建议称 0.1g 样本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃
离心 5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min 4℃离心 10min,弃上清(取 300μL 该上清
液和 300μL 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加
入 0.5mL 酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重
复 30 次),取此溶液 300μL 和 300μL 碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋
白质含量测定)。
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