上海谷研实业有限公司
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线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒紫外分光光度法
  • 英文名称:MCA
  • 品牌:谷研
  • 产地:国产
  • 货号:GOY-SH378-B
  • 价格: ¥2500/盒
  • 发布日期: 2018-11-14
  • 更新日期: 2025-05-13
产品详请
产地 国产
品牌 谷研
货号 GOY-SH378-B
用途 仅供科研实验
英文名称 MCA
包装规格 50管/48样
纯度 %
CAS编号
别名 线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒
分子式
是否进口

线粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒紫外分光光度法


商品属性:

检测方法

规格

货号

紫外分光光度法

50管/48样

GOY-SH378-B

测定意义:

CA 是线粒体三羧酸循环的 个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰 CoA 与草酰乙酸合成, 其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。 配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量, 其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙 酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰 CoA 情况,(3)乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 CA 含量变化可以反映三羧酸循环进行 状况。 
测定原理:

CA 在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步
与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰,该波长下吸光度
的变化程度可反映出 CA 的含量。
自备仪器和用品:
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿、研钵和蒸馏水。

试剂组成和配制:

酸性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
碱性提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存;临用前加入 15mL 蒸馏水充分溶解待用;用不完的试剂 4℃
保存。
标准品:液体 1mL×1 支,10μmol/mL 柠檬酸标准液,4℃保存。

提取:
 称 0.05~0.1g 样品(建议称 0.1g 样本),加入 0.5mL 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃
离心 5min;取上清至另一 EP 管中,11000g/min 4℃离心 10min,弃上清(取 300μL 该上清
液和 300μL 碱性提取液中和后可用于细胞质 CA 含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加
入 0.5mL 酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率 20%,超声 3 秒,间隔 10 秒,重
复 30 次),取此溶液 300μL 和 300μL 碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋
白质含量测定)。

测定操作:
 1、分光光度计预热 30 min 以上,调节波长到 330nm,蒸馏水调零。
2、试剂一、二和三 37℃预热 10min。
3、样本测定:
空白管和标准管通常只需要各做一个。
试剂名称(μL) 空白管 标准管 测定管
试剂一 300 300 300
蒸馏水 300
标准液 300
样本 300
试剂二 100 100 100
试剂三 300 300 300
充分混匀,330nm 立即测定初始吸光值 A1 和 37℃孵育 30min 后的吸光值 A2,ΔA=A2 –A1。
计算公式:
(1)按蛋白浓度计算
柠檬酸含量(μmol/mg prot)=[C 标准管×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管)
×V 样]÷(V 样÷Cpr)=10×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管)÷Cpr
蛋白质含量需要另外测定。
(2)按样本鲜重计算
柠檬酸含量(μ mol/g鲜重)=[C标准管×(ΔA测定管-ΔA空白管)÷(ΔA标准管-ΔA空白管) ×V
样]÷(W×V 样÷V 样总)=10×(ΔA 测定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 标准管-ΔA 空白管)÷W
C 标准管:标准液浓度,10μmol/mL; V 样:加入反应体系中样本体积,0.3mL;V 样总:
加入提取液体积,1mL;Cpr:样品蛋白浓度,mg/mL;W:样本质量,g。
注意: 检测限为 10nmol/mg prot 或 1μmol/g 鲜重。

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