单宁酶(TAN)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

单宁酶全称是单宁酯酰水解酶(Tannase，EC 3.1.1.20)，它可以水解没食子酸单宁中的酯键和

缩酚羧键，生成没食子酸和葡萄糖。
测定原理：

使用抗氧化剂没食子酸丙酯（PG）作为单宁酶酶促反应的底物，在 270nn 下测定底物 PG

反应前后的光密度变化,计算单宁酶酶活力。自备仪器和用品:紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔 UV板、研钵、冰、蒸馏水

试剂组成和配制：

试剂一：液体 100mL×2 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；临用前每支加入 6mL 试剂一，充分溶解后备用；用不完的

试剂 4℃保存；
酶液提取：
按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL

试剂一），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

液体样本：直接取上清测定。 
测定操作：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长到 270 nm，蒸馏水调零。
2、加样表
试剂名称（μL） 对照管 测定管
95℃水浴 5min 后灭活的粗酶液 50
粗酶液 50
试剂二 50 50
混匀，40℃准确保温 10 min 后，置 95℃水浴中 10 min（盖紧，防止水分散失），冷却
试剂一 900 900
混匀，取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔 UV 板中，270nm 处读取各管吸光值。计算ΔA=A
对照-A 测定。每个测定管需设个一个对照管。
注意：
1、 可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 5min 95℃沸水浴处理。
2、 务必使用 96 孔 UV 板（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，
检测波长小于 340nm 务必使用 UV 板）。

计算公式：
TAN 活力单位的计算
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0058x + 0.0044，R2 = 0.9994；x 为 PG 含量（μmol/L），y
为吸光值。
1、按样本体积计算
单位的定义：40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少 0.01μmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶活单位。
TAN 活性(μmol/min/mL)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷V 样÷T
=34.48×( ΔA-0.0044）
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少 0.01μmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一
个酶活单位(U)。
TAN 活性((μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样×Cpr)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044）÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义：40℃下每克样品每分钟水解减少 0.01μmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个
酶活单位(U)。
TAN 活性(μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044）÷0.0058÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T
=34.48×(ΔA-0.0044）÷W
V 反总：反应体系总体积，1mL； V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体
积，1 mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0029x + 0.0044，R2 = 0.9994；x 为 PG 含量（μmol/L），y
为吸光值。
1、按样本体积计算
单位的定义：40℃下每毫升粗酶液每分钟水解减少 0.01μmol 底物 PG 所需要的酶量定义为
一个酶活单位(U)。
TAN 活性(μmol/min/mL)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷V 样÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：40℃下每毫克蛋白每分钟水解减少 1μmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个酶
活单位(U)。
TAN 活性(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样×Cpr)÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）÷Cpr
3、按照样本鲜重计算
单位的定义：40℃下每克样品每分钟水解减少 0.01μmol 底物 PG 所需要的酶量定义为一个
酶活单位(U)。
TAN 活性(μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0044）÷0.0029÷1000×V 反总÷0.01÷(V 样÷V 样总×W)÷T
=68.97×( ΔA-0.0044）÷W
V 反总：反应体系总体积，1mL； V 样：加入样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体
积，1 mL；T：反应时间，10min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。

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