多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一种细胞壁结合蛋白，可以催化果胶分子中 α-(1,4)-聚半

乳糖醛酸的裂解，参与果胶的降解，使细胞壁结构解体，导致果实软化，与果实成熟、叶和

花的脱落、病原物防御，细胞伸展发育以及木质化有关，在植物抗病性和食品贮藏保鲜领域

具有较高的研究价值。
测定原理：

多聚半乳糖醛酸酶水解果胶酸生成半乳糖醛酸，具有还原性醛基，与 DNS 试剂反应生成红

棕色物质，在 540nm 有特征吸收峰，测定 540nm 处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶

活性。自备仪器和用品:天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 8mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。

酶液提取：
1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，

加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。16000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议

500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，

总时间 3min）；然后 16000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。

3．培养液：直接检测。 
测定操作：
对照管 测定管

样本（μL） 30

煮沸样本（μL） 30

试剂一（μL） 120

蒸馏水 120

40℃水浴 30min

试剂二（μL） 150 150

沸水浴 5min，冰浴或自来水冷却，取 200μL 于微量石英比色皿/96 孔板测

定 540nm 处吸光值 A，△A=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。 

计算公式：
酶活性计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y = 3.9642x - 0.008；R
2
= 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸
为一个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为
一个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/g 鲜重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3．按液体体积计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛
酸为一个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷V 样÷T=2.523×(ΔA+0.008)
4. 按细胞数量计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每 104个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛
酸为一个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/104
cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量
V 反总：反应总体积，0.15mL；V 样：反应中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体
积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y = 1.9821x - 0.008，R
2
= 0.9996；x 为标准品浓度，mg/mL；y 为吸光值。
1．按照蛋白浓度计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每毫克蛋白每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸
为一个酶活力单位。
PG 活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr
2．按照样本质量计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每克样本每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛酸为
一个酶活力单位（U）。
PG 活性（mg/h/g 鲜重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷W
3．按液体体积计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每毫升培养液每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛
酸为一个酶活力单位（U）。
PG 活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷V 样÷T=5.045×(ΔA+0.008)
4. 按细胞数量计算
酶活性定义：在 40℃，pH6.0 条件下，每 104个细胞每小时分解果胶酸产生 1mg 半乳糖醛
酸为一个酶活力单位（U）。
PG 活性（mg/h/104
cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷细胞数量
V 反总：反应总体积，0.15mL；V 样：反应中样本体积，0.03mL；V 样总：加入提取液体
积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，0.5h
注意事项
煮沸样本建议将样本在沸水中煮沸 10 分钟，以将酶 灭活。

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