单宁含量测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

单宁是一类广泛存在于植物体内的多元酚化合物，又称植物多酚。具有独特的化学性质和多种生理活性，如能与蛋白质、生物碱、多糖结合；能与多种金属离子发生络合或静电作用；具有止血、抑制微生物、抗过敏等生理活性。

测定原理：

单宁在碱性环境下与磷钼酸反应，生成蓝色化合物，在 760nm 处有 吸收峰。自备仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵和蒸馏水。
试剂组成和配制：

试剂一：液体 10 mL× 1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 8 mL × 1 瓶，4℃保存；
酶液提取：
按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 蒸馏水），充分

匀浆后转移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min， 8000 g，25℃离心 10 min，取上清液待测。
测定操作：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 760nm，蒸馏水调零；试剂一和试剂二 37℃预热 10min 以上；

2、操作表：

试剂名称（μL） 对照管 测定管

样本 25

蒸馏水 675 650

试剂一 175 175

混匀，室温静置 5min

试剂二 150 150

混匀，室温静置 30min，760nm 处读取吸光值 A，ΔA=A 测定-A 对照，对照管只要做一管。
计算公式：
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 1.6418x +0.0134；x 为标准品浓度(mg/mL)，y 为ΔA(A 测定-A 对照)。
2、按样本鲜重计算：
单宁含量（mg /g 鲜重）= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷（W×V1÷V2）=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。
3、按样本蛋白浓度计算：
单宁含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。
V1：加入样本体积，0.025mL；V2：加入提取液体积，1mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜
重，g。
注意：
1、 ΔA 控制在 0.02-0.8 范围内，若ΔA 大于 0.8，将样本提取上清液用蒸馏水稀释 10 倍后检测，计算公式
中乘以相应稀释倍数。
2、 标准曲线线性范围为：0.025mg/mL-0.5mg/mL。

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