单胺氧化酶(MAO)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎动物的各种器官，特别是分泌腺、脑、肝脏，在无脊椎动

物、豆类的芽等植物中也存在催化单胺类物质代谢，含量较低，具有重要的生理功能，其活

性能反映的程度。此外，MAO 活性异常导致细胞内单胺类神经递质运转出现紊乱，

从而引发多种。
测定原理：

MAO 催化单胺类底物脱氨生成相应的醛，进一步氧化成酸；底物在 360nm 处有特征吸收峰，

测定 360nm 光吸收下降的速率，计算 MAO 活性。自备仪器和用品:天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制：

提取液一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

提取液二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 2.5mL×1 管，4℃避光保存。
酶液提取：
1. 称取约 0.1g 样品，加 1 mL 预冷的提取液一充分冰浴匀浆，1000g，4℃，离心 10min，
弃沉淀；把上清转移到另一预冷的离心管，10000g，4℃，离心 30min，弃上清；加入
1mL 预冷的提取液二，震荡混匀，16000g，4℃，离心 40min，弃上清；沉淀加入预冷
的 1mL 试剂一，震荡混匀，即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定）。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建
议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7
秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，弃沉淀；把上清转移到另一预冷
的离心管，10000g，4℃，离心 30min，弃上清；加入 1.0 mL 预冷的提取液二，震荡混
匀，16000g，4℃，离心 40min，弃上清；沉淀加入预冷的 1.0 mL 试剂一，震荡混匀，
即粗酶液（可用于可溶性蛋白浓度测定），取上清置于冰上待测。
3. 血清：直接测定。

测定操作：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 360nm。

2、操作表

空白管 测定管

酶液（μL） 20

试剂一（μL） 180 160

试剂二（μL） 20 20

混匀，立即测定 360nm 处测定管和空白管吸光值，分别记为 A1 和 A2；然后 37℃反应 60min，

再次测定 360nm 处测定管和空白管吸光值，分别记为 A3 和 A4；计算ΔA=（A1-A2）-(A3-A4)

注意：空白管只需测定一次。
计算公式：
a．用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每毫克蛋白质 1min 内转化 1 nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（nmol/min / mg prot）=
d
A
×
?
ε ×V 反总÷（V 样× Cpr）÷T= 114×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每克样品 1min 内转化 1 nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（nmol/min / g 鲜重）= d
A
×
?
ε ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T = 114×ΔA÷ W
3、按照细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每 104 个细胞 1min 内转化 1 nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（nmol/min / 104 cell）=
d
A
×
?
ε ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）÷T
= 114×ΔA÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每 mL 血清 1min 内转化 1 nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（nmol/min /mL）= d
A
×
?
ε ×V 反总÷V 样=114×ΔA
ε：底物摩尔消光系数，1460L /mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.2mL；
V 样：反应中样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，
mg/mL；T：反应时间，60min，W：样本质量，g
b．用 96 孔板测定的计算公式如下
1、按蛋白含量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每毫克蛋白质 1min 内转化 1 nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（nmol/min / mg prot）=
d
A
×
?
ε ×V 反总÷（V 样× Cpr）÷T= 228×ΔA÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每克样品 1min 内转化 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（nmol/min / g 鲜重）= d
A
×
?
ε ×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）÷T = 228×ΔA÷ W
3、按照细胞数量计算
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每 104 个细胞 1min 内转化 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（nmol/min / 104 cell）=
d
A
×
?
ε ×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）÷T
= 228×ΔA÷细胞数量
4、 按照液体体积计算
酶活定义：37℃，pH7.6 时，每 mL 血清 1min 内转化 1nmol 底物的酶量为一个酶活单位。
MAO 活性（nmol/min /mL）= d
A
×
?
ε ×V 反总÷V 样=228×ΔA
ε：底物摩尔消光系数，1460L /mol /cm； d：96 孔板光径，0.5cm；V 反总：反应总体积，
0.2mL；V 样：反应中样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋
白浓度，mg/mL；T：反应时间，60min，W：样本质量，g
注意事项：
1、吸光度变化应该控制在 0.01～0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参
与计算的稀释倍数要相应改变。
2、样品蛋白质含量需要另外测定。

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