非蛋白质巯基测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的功

能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。
测定原理：

巯基基团与 5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有最

大吸收峰。自备仪器和用品:天平、研钵、恒温水浴锅、酶标仪、96 孔板、乙醇和蒸馏水。
试剂组成和配制：

提取液：液体 100 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：液体 18 mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 1mL×1 管，4℃避光保存。

酶液提取：
1. 按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入

1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 8000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2. 血清，培养液：取 0.1mL 样本，加入 0.4mL 提取液，混匀，室温静置 10min, 然后 8000g，

4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定操作：
1、 酶标仪预热 30min，调节波长至 412nm。

2、操作表

在 96 孔板中加入如下试剂

对照管 测定管

样品（μL） 40 40

试剂一（μL） 150 150

试剂二（μL） 10

乙醇（μL） 10

混匀，25℃静置 10min，测定 412nm 吸光值。ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管设一个对照管。
计算公式：
非蛋白巯基标准曲线：y = 1.8111x - 0.0037，R2 = 1，x 为标品浓度，单位 μmol/mL，y 为吸
光度ΔA。
1. 组织：
（1）按样本重量计算
非蛋白巯基含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V 样总÷W
=0.552×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算
非蛋白巯基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×V 样总÷Cpr
=0.552×（ΔA+0.0037）÷Cpr

2. 血清、培养液：非蛋白巯基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷1.8111×5×103
=2761×（ΔA+0.0037）
V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样品质量，g ；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；5：血
清，培养液等液体样本稀释倍数；103 ：1mmol/ L=103μmol/ L
注意事项
检出限为 10μmol/L。

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