淀粉分支酶(SBE)测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是参与支链淀粉合成的关键酶，测定 SBE 活性在淀

粉生物合成、 农作物品种选育和品质遗传改良研究中具有重要意义。
测定原理：

直链淀粉和碘结合后在 660nm 有特征光吸收，SBE 使直链淀粉含量减少，一定时间内吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。自备仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水

试剂组成和配制：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×2 支，4℃保存；临用前每支加入 1mL 蒸馏水，95℃沸水浴充分溶解后备用；

用不完的试剂 4℃保存；

试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL

提取液），进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定操作：
试剂名称（μL） 对照管 测定管

95℃水浴 1min 后灭活的粗酶液 250

粗酶液 250

试剂一 320 320

试剂二 30 30

混匀，37℃准确保温 20 min，95℃水浴 5min（盖紧防止水分散失），冷却

试剂三 500 500

试剂四 40 40

混匀，室温静置 10min，用蒸馏水调零，660nm 处读取各管吸光值。

注意：

1、可以在不同对照管中加入不同样品的粗酶液，然后集中进行 5min 95℃水浴处理。

2、试剂二如有沉淀，务必沸水浴溶解后使用。
计算公式：
SBE 活力单位的计算
1、按照蛋白浓度计算
单位的定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在反应体系中每降低 1％
碘蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/mg prot)=( A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷Cpr ×100
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：以波长 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 g 组织在反应体系中每降低 1％碘
蓝值为一个酶活性单位。
SBE 活性(U/g 鲜重)=(A 对照管-A 测定管)/A 对照管÷(W÷V 样总)×100
V 样总：提取液总体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

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