淀粉含量测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

淀粉是植物中糖的主要储存形式，其含量测定对于评价食品营养价值和调查植物体内糖代谢

都有重要意义。
测定原理：

利用 80％乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开，进一步采用酸水解法分解淀粉为葡萄糖，

采用蒽酮比色法测定葡萄糖含量，即可计算淀粉含量。自备仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰、浓硫酸（不允许快递）和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：液体 70mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；
酶液提取：
1、 称取 0.1~0.2g 新鲜样本（建议称取约 0.1g 新鲜样本）于研钵中研碎，加入 1mL 试剂一，
充分匀浆后转移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃离心 5min，弃上清，留
沉淀。
2、 沉淀中加入 0.5mL 蒸馏水，放入 95℃水浴中糊化 15min（盖紧，以防止水分散失）。
3、 冷却后，加入 0.35mL 试剂二，25℃常温提取 15min，振荡 3-5 次。
4、 加入 0.85mL 蒸馏水，混匀，3000g，25℃离心 10min，取上清液待测。
注意：如样本为淀粉含量较高的干样，为保证充分提取，可适当减小取样量，如称取
0.01g~0.02g 干样，加入 1mL 试剂一，其余提取步骤同上。

测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 620nm，蒸馏水调零。

2、 调节水浴锅至 95 度。

3、工作液的配制：临用前在试剂三中加入 3.75mL 蒸馏水后，缓慢加入 21.25mL 浓硫酸，

不断搅拌，充分溶解，待用；用不完的试剂 4℃保存一周；

4、样本测定：取50μL样本和250μL工作液至EP管中，95度水浴10 min（盖紧，防止水分散

失），自然冷却至室温，取200uL至微量石英比色皿或96孔板中，在620 nm 波长下记录测

定吸光度值A。 
计算公式：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 5.872x - 0.0295；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr
2、按样本鲜重计算
淀粉含量(mg/g 鲜重)= [(A+0.0295)×V1] ÷5.872÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1.7 mL；Cpr：样本蛋白质
浓度，mg/mL；W：样本质量，g
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为 y = 2.936x - 0.0295；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936 ÷(V1×Cpr)=0.34×(A+0.0295) ÷Cpr
2、按样本鲜重计算
淀粉含量(mg/g 鲜重)=[(A+0.0295)×V1]÷2.936÷(W×V1÷V2) =0.578×(A+0.0295) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.05mL；V2：加入提取液体积，1.7 mL；Cpr：样本蛋白质
浓度，mg/mL；W：样本质量，g
注意：由于工作液具有强腐蚀性，请谨慎操作。
 若吸光值大于1，请将样本用提取液稀释后再测定，计算公式中乘以相应的稀释倍数。
提取液的配置：0.35mL 试剂二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。
检测限为 10μg/g 鲜重或 100ng/mgprot。

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