查尔酮异构酶(CHI)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

查尔酮异构酶(Chalcone isomerase, CHI)是 个被认识的黄酮类化合物合成相关酶，也是黄

酮代谢途径中的关键酶之一。查尔酮异构酶和查尔酮合酶一起构成了黄酮类化合物生物合成

的限速酶。
测定原理：

查尔酮异构酶（CHI）催化查尔酮环化形成 4,5,7-三羟基黄烷酮，通过测定 381nm 下的吸光

度变化表示 CHI 的活性。自备仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；用时加入 20mL 试剂一充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保

存。
酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入

1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 381nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定表

在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 上清液和 190μL 试剂二，立即混匀并记录 381nm

下初始吸光值 A1 和 37℃保温 30min 后的吸光值 A2。计算 ΔA＝A2-A1。 
计算公式：
CHI 活性计算：
用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每小时 A381 变化 0.1 为一个酶活力单位。
CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.1÷T =400×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每小时 A381 变化 0.1 为一个酶活力单位。
CHI（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.1÷T =400×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL； V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液
体积，1 mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位定义：每 mg 组织蛋白在每 mL 反应体系中每小时 A381 变化 0.05 为一个酶活力单位。
CHI（U/mg prot）＝ΔA×V 反总÷（V 样×Cpr）÷0.05÷T =800×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每 g 组织在每 mL 反应体系中每小时 A381 变化 0.05 为一个酶活力单位。
CHI（U/g 鲜重）＝ΔA×V 反总÷(W× V 样÷V 样总)÷0.05÷T =800×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，0.2mL； V 样：加入样本体积，0.01mL；V 样总：加入提取液
体积，1 mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。

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