β1,3葡聚糖酶(β1,3GA)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化 β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其 他逆境条件下，可诱导细胞大量合成 β-1,3-GA，因此 β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病 理和逆境生理研究。 

测定原理：

β-1,3-GA 水解昆布多糖，内切 β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率 来计算其酶活性。 自备仪器和用品： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、 冰和蒸馏水。 

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 2mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂 4℃ 保存； 试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

酶液提取：
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提 取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）； 12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 3、血清（浆）样品：直接检测。 
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。 2、样本测定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 样本 35 35 蒸馏水 35 试剂一 35 充分混匀，放入 37℃水浴 60 min 试剂二 230 230 充分混匀，95℃水浴 5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，取 200μL 至微量石英比色皿 或 96 孔板中， 550nm 处记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定 （计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。
计算公式：
β-1,3-GA 活性计算： a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0958x -0.0192；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。 2、血清（浆）β-1,3-GA 活力的计算 单位的定义：每 mL 血清（浆）每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷V1=10.438×(ΔA +0.0192) 3、细胞、细菌和组织中 β-1,3-GA 活力的计算 (1) 按蛋白浓度计算 单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr (2) 按样本鲜重计算 单位的定义：每 g 组织每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h/g 鲜重)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(W×V1÷V2)= 10.438×(ΔA +0.0192) ÷W (3) 按细菌或细胞密度计算 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0208×(ΔA+0.0192) V1：加入反应体系中样本体积，0.035mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质 浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。 b.用 96 孔板测定的计算公式如下 1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0479x -0.0192；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。 2、血清（浆）β-1,3-GA 活力的计算 单位的定义：每 mL 血清（浆）每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h/mL)=[( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷V1=20.876×(ΔA +0.0192) 3、细胞、细菌和组织中 β-1,3-GA 活力的计算 (1) 按蛋白浓度计算 单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h/mg prot)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(V1×Cpr)=20.876×(ΔA +0.0192) ÷Cpr (2) 按样本鲜重计算 单位的定义：每 g 组织每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h/g 鲜重)= [(ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(W×V1÷V2)= 20.876×(ΔA +0.0192) ÷W (3) 按细菌或细胞密度计算 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。 β-1,3-GA(mg/h /104 cell)= [( ΔA +0.0192)÷0.0479×V1]÷(500×V1÷V2)=0.0416×(ΔA+0.0192) V1：加入反应体系中样本体积，0.035mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质 浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。 
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