丙二醛(MDA)测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，后者逐渐分解为一系列复杂的化合

物，其中包括 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。
测定原理：

MDA 与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成红色产物，在 532nm 有 吸收

峰，进行比色后可估测样品中的含量；同时测定 600nm 下的吸光度，利用 532nm

与 600nm 下的吸光度的差值计算 MDA 的含量。自备仪器和用品:可见分光光度、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；

注意事项：

临用前注意试剂一是否完全溶解，如未溶解，可以 70℃-90℃加热，并振荡以促进溶解。
酶液提取：
MDA 提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；
8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。

测定操作：
1、吸取 0.6mL 试剂一于 1.5mL 离心管中，再加入 0.2mL 样本, 混匀。

2、95℃水浴中保温 30min（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，25℃，离心

10min。

3、吸取上清液于 1mL 玻璃比色皿中，测定 532nm 和 600nm 处的吸光度，记为 A532 和 A600，

ΔA= A532-A600。
计算公式：
MDA 含量计算：
1、血清（浆）中 MDA 含量的计算：
MDA 含量(nmol/ mL)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×10
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]÷V 样=25.8×ΔA
2、细菌、细胞或动物组织中 MDA 含量计算
（1）按照蛋白浓度计算
MDA 含量(nmol/ mg prot)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(Cpr×V 样)=25.8× ΔA ÷Cpr
需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。
（2）按照样品质量计算
MDA 含量(nmol/g 鲜重)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(W ×V 样÷V 样总)=25.8×ΔA ÷W
(3 ) 按照细菌或细胞密度计算：
MDA 含量(nmol/104
)=[ ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(500×V 样÷V 样总)=0.0516×ΔA
V 反总：反应体系总体积， 8×10-4
L；ε：丙二醛摩尔消光系数，155×103
L / mol /cm；d：
比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.2 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；Cpr：
样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。

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