免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。

参数规格：

抗体的生活习性：

(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。

(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。

(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。

(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过及粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗体对理化因子的与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在 上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。

实验步骤:

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

② HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

抗体的多样性：

抗体的异质性。抗体的组成极为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸的组成和排列上，既相似，又有差别。由于有差别，它们的电泳活性就有很大的变化。

因为抗体具有与抗原决定簇相对应的结合部位（抗原结合簇），所以抗体与抗原的结合具有特异性。另一方面，抗体本身是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。各类Ig都具有可用血清学方法检出的抗原特异性，它们表现出不同的血清学类型。
人非小细胞细胞，NCI-H358细胞TNFRSF8/CD30 (E7E4D) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)

人非小细胞细胞，NCI-H1299细胞RAGE 1 (D1A12) Rabbit mAb

人非小细胞细胞，NCI-H1915细胞UBE2N (D2A1) Rabbit mAb

人非小细胞，NCI-H157细胞SignalSilence® ULK1 siRNA I

人细胞(淋巴结转移)，NCI-H292细胞SimpleChIP® Human Timeless Intron 1 Primers

人细胞,A549细胞Non-phospho (Active) β-Catenin (Ser45) (D2U8Y) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

人细胞，Calu-1细胞HO-1 Antibody

人细胞，NCI-H2126细胞p300 (D1M7C) Rabbit mAb

人细胞，NCI-H3255细胞0.5 M EDTA

人细胞，PC-9细胞RALY Antibody

人,HFL-1细胞TAZ (D3I6D) Rabbit mAb

人肺鳞癌细胞，NCI-H226细胞SimpleChIP® Human RPL30 Exon 3 Primers

人肺鳞癌细胞，NCI-H520细胞SimpleChIP® Mouse RPL30 Intron 2 Primers

人肺鳞癌细胞，NCI-H1703细胞DTT (Dithiothreitol)
HMGB1 (D3E5) Rabbit mAb1-(tert-Butyl)-4-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolan-2-yl)-1H-pyrazole呋喃它酮(AMOZ)快速检测试剂卡（鸡肉/水产品，1ppb，消线法）

4-(Bromomethyl)benzaldehyde呋喃它酮(AMOZ)快速检测试纸条（检组织/鸡蛋/蜂蜜，0.5ppb，比色法）

2-Chloro-6-fluoropyridine氟喹诺酮快速检测试纸条（检鸡蛋，检测限20-40ppb，消线法）

顺式-1,2-环己二胺四环素快速检测试纸条（检鸡蛋，50ppb,消线法）

3-氟-4-羟基苯四环素快速检测试纸条（检组织，检测限100ppb,消线法）

醋亮瑞林喹醇代谢物(MQCA）ELISA检测试剂盒（检组织/饲料，灵敏度0.2ppb，两步法）

2-(3-Methyl-5-(trifluoromethyl)phenyl)acetic acid磺胺类（Sas）快速检测试纸条（检组织，检测限5-45ppb,比色法）

2,5-噻吩二羧磺胺类（Sas）多残留检测卡(检尿样，检测限25-100ppb,消线法）

5-氯-2-氧基苯醛磺胺类（Sas）多残留快速检测卡(检鸡蛋，检测限30-100ppb,消线法）

N-[(4-氨基苯基)-基磺酰基]咯烷庆大快速检测试纸条（检组织，检测限30ppb，比色法）

2'-C-基鸟苷庆大快速检测试纸条（检尿样，检测限50ppb,消线法）

3-氟-4-氯啶链(Strep)快速检测试纸条（检尿样，检测限80ppb,消线法）

Maltotriose四环素快速检测试纸条（检组织，检测限30ppb,比色法）