免疫荧光技术的实验步骤：

一、准备好试剂与仪器：

磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。

二、实验步骤

1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，十分钟后弃去，使标本保持一定湿度。

2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间以三十分钟为参考。

3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分钟，并不停地摇晃振荡。

4.取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。

参数规格：

抗体的生活习性：

(1)结合特异性抗原：抗体与其他免疫球蛋白分子区别，就在于抗体能与相应抗原发生特异性结合，在体内导致生理或病理效应;在体外产生各种直接或间接的可见的抗原抗体结合反应。抗体是靠其分子上的特殊的结合部位与抗原结合的。

(2)激活补体：抗体与相应抗原结合后，借助暴露的补体结合点去激活补体系统、激发补体的溶菌、溶细胞等免疫作用。

(3)结合细胞：不同类别的免疫球蛋白，可结合不同种的细胞，产生不同的疚，参与免疫应答。

(4)可通过胎盘及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通过胎盘进入胎儿血流中，使胎儿形成自然被动免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通过及粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。

(5)具有抗原性：抗体分子是一种蛋白质，也具有刺激机体产生免疫应答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。

(6)抗体对理化因子的与一般球蛋白相同：不耐热，60～70℃即被破坏。各种酶及能使蛋白质凝固变性的物质，均能破坏抗体的作用。抗体可被中性盐类沉淀。在 上常可用硫酸铵或硫酸钠从免疫血清中沉淀出含有抗体的球蛋白，再经透析法将其纯化。

实验步骤:

① 滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10min后弃去，使标本保持一定湿度。

② Phospho-Btk (Tyr223) (D9T6H) Rabbit mAb滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30min）。

③ 取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS冲洗后，再按顺序过0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸3-5 min，不时振荡。

④ 取出玻片，用滤纸吸去多余水分，但不使标本干燥，加一滴缓冲甘油，以盖玻片覆盖。

⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度，一般可用“+”表示：

（-）无荧光；（±）极弱的可疑荧光；（+）荧光较弱，但清楚可见；（++）荧光明亮；（+++ --++++）荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++”以上，而各种对照显示为（±）或（-），即可判定为阳性。

抗体的多样性：

抗体的异质性。抗体的组成极为复杂，是由成千上万、多种多样的免疫球蛋白（Ig）分子所组成。这些Ig分子在形状、大小、结构以及氨基酸的组成和排列上，既相似，又有差别。由于有差别，它们的电泳活性就有很大的变化。

因为抗体具有与抗原决定簇相对应的结合部位（抗原结合簇），所以抗体与抗原的结合具有特异性。另一方面，抗体本身是一种蛋白质，具有本身的氨基酸组成、排列和立体结构，对异种动物来说，它又是抗原。各类Ig都具有可用血清学方法检出的抗原特异性，它们表现出不同的血清学类型。
 5-氯-2-(4-氯苯氧基)-苯胺Sandwich ELISA, Double Antibody

 2-基-3-硝基-5-氯啶Sandwich ELISA, Double Antibody

 2-溴-3-氟异烟Sandwich ELISA, Double Antibody

 3-酰基-4-氧基苯硼Sandwich ELISA, Double Antibody

 头孢罗齐Sandwich ELISA, Double Antibody

 N-酰基-5'-O-(4,4-二氧基三苯基)-2'-O-[(叔基)二基硅基]胞苷-3'-(Sandwich ELISA, Double Antibody

 2,4-二叔戊基苯酚Sandwich ELISA, Double Antibody

 三羰基(η-环戊二烯基)合锰二聚体Sandwich ELISA, Double Antibody

 5-氯-1,3-二氟-2-苯Sandwich ELISA, Double Antibody

 1-Boc-2-基哌嗪Sandwich ELISA, Double Antibody

 对二酰氧基苯Sandwich ELISA, Double Antibody

 二苯二二醇酯Sandwich ELISA, Double Antibody

 五氟苯酚生物素酯Sandwich ELISA, Double Antibody

 6-氧基-2-巯基苯并噻唑Sandwich ELISA, Double Antibody
Phospho-Btk (Tyr223) (D9T6H) Rabbit mAb外消旋5-羟基去异基托特罗定-d6Goat anti-Rat IgG (H&L), HRP conjugated, min. cross-reactivity to human, mouse IgG （AS101094）

外消旋5-羟基托特罗定-d14Donkey anti-Rat IgG (H&L), Biotin conjugated, min. cross-reactivity to bovine, chicken, goat, guinea pig, hamster, horse, human, mouse, rabbit, sheep IgG （AS101093）

外消旋5-羧基去异基托特罗定-d6Donkey anti-Goat IgG (H&L), FITC conjugated, min. cross-reactivity to human, mouse, rabbit, rat IgG （AS101092）

外消旋5-羧基托特罗定-d14Goat anti-Human IgA (alpha chain), FITC conjugated （AS101091）

外消旋7-羟基心得安-d5Goat anti-Human IgM (μ chain), F(ab)'2 fragment, TRITC conjugated, min. cross-reactivity to human IgG or IgA （AS101090）

外消旋安倍生坦-d3Goat anti-Human IgG (H&L), TRITC conjugated （AS101089）

外消旋反式盐舍曲林-d3Goat anti-Rat IgG (H&L), F(ab)'2 fragment, TRITC conjugated, min. cross-reactivity to human, mouse IgG （AS101088）

外消旋非洛地平-d3Donkey anti-Mouse IgG (H&L), HRP conjugated, min. cross-reactivity to bovine,chicken, goat, guinea pig, hamster, horse, human, rabbit, rat or sheep IgG （AS101087）

外消旋磺雷沙吉兰-13C3Goat anti-Rabbit IgG (H&L), ALP conjugated, min. cross-reactivity to bovine,goat,human, mouse,rat IgG （AS101086）

外消旋酯萘普生-d3Goat anti-Human IgG Fc, FITC conjugated, min. cross-reactivity to bovine,mouse,rabbit serum （AS101084）

外消旋卡巴拉汀-d6Donkey anti-Rabbit IgG (H&L), Biotin conjugated, min. cross-reactivity to bovine, chicken, goat, guinea pig, hamster, horse, human, mouse, rat, sheep IgG （AS101083）

外消旋雷美替胺-d3Donkey anti-Mouse IgG (H&L), Affinity purified, Unconjugated, min. cross-reactivity to bovine,chicken, goat, guinea pig, hamster, horse, human, rabbit, rat or sheep IgG （AS101082）

外消旋氯格雷硫盐-d4Goat anti-Mouse IgG (H&L), F(ab)'2 fragment, Biotin conjugated （AS101081）