大鼠肉毒碱脂酰转移酶(CACT)elisa试剂盒操作步骤

大鼠肉毒碱脂酰转移酶(CACT)elisa试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。
MN-h, 小鼠海马神经元
MN-s, 小鼠纹状体神经元
mOPC, 小鼠少突胶质前体细胞
MA, 小鼠星形胶质细胞
MLF, 小鼠淋巴成纤维细胞
mRTEC, 小鼠肾小管上皮细胞
CSC, 小鼠心肌细胞
小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）
MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞
MM, 小鼠小胶质细胞
mCF, 小鼠心脏成纤维细胞
MN-c, 小鼠皮质神经元
 细胞名称
人绒毛膜毛细血管内皮细胞
人羊膜上皮细胞
人绒毛间充质成纤维细胞
人羊膜间充质基质细胞
人绒毛膜间充质基质细胞
 细胞名称
NRK-52E，大鼠肾细胞
H9c2大鼠心肌细胞（ATCC来源）
NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系
大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）
HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系
CHO, 中国仓鼠卵巢细胞系
COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞