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死细胞与活细胞的判别方法

2018-11-02

     健康细胞与衰老死亡细胞的观察 健康细胞即是所谓的活细胞。在显微镜视场下.健康细胞的形态表现为细胞匀质明亮.透明度大,折 光性强。相差显微镜的视场下,可以看清细胞的形态结构,细胞质中有粗大的线粒体颗粒和细胞核。 细胞培养术语中,死细胞一般指衰老细胞和死亡细胞的总称。 另外.相对于正常细胞大小两倍以上或l/2以下的细胞分别称作“大细胞”或“小细胞”。“大细 胞”可以理解为多个细胞融合形成的临时细胞,或细胞经历核分裂但未能完成细胞质分裂的那些细 胞,这些细胞不能正常分裂,故属于死细胞。“小细胞”一般是由于培养环境或培养液含有细胞凋亡 因素,由细胞凋亡形成的规则小膜泡。


1.微量移液器的结构及其使用 通常需要使用微量移液器的辅助才能将细胞培养物的单细胞悬液准备好,以便在显微镜下观察细胞的 形态特征。 对微量移液器的结构了解是非常必要的。使用时.微量移液器的操作手势和取吸嘴动作要领也 有一定的规范,具体参考指导教师的现场示范动作。使用时,所取液体不可接触移液器吸嘴连接部。 移液器调节刻度至zui大量程以免影响移液器的精密度。存放时应立放于指定位置。


2.台盼蓝染色法 用微量移液器定量移取单细胞悬液,另取0.4%台盼蓝染液与细胞悬液按1:1比例混匀。然后滴加到干 净的载玻片上,加盖玻片使成单层细胞悬液。 染色3~5min后,在100×显微视场下观察。死细胞和细胞碎片均被染成蓝色,活细胞则不着色。 此种方法应用比较广泛,技术难度相对较小。 但需注意,有些异常大小的、不着色的细胞不一定是活细胞,如“大细胞”和“小细胞”。


3.显微形态直接判别 用微量移液器定量移取单细胞悬液,滴加到干净的载玻片上,加盖玻片使成单层细胞悬液。这种方法 判别死活细胞有一定的技术难度,需要经过训练才能逐步把握。