人小脑颗粒细胞培养方法

人小脑颗粒细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
缓冲蛋白胨水 9ml 30 支/盒
缓冲蛋白胨水 90ml/瓶
改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古酶素 10ml 30 支/盒
胰酪胨大豆琼脂培养基（β-内酰胺酶） 90mm 10 个/包
 胰酪胨大豆琼脂培养基 200ml/瓶
赖氨酸脱羧酶试验培养基 2ml 30 支/盒
鸟氨酸脱羧酶试验培养基 2ml 30 支/盒
蔗糖发酵管 5ml 30 支/盒
山梨醇发酵管 5ml 30 支/盒
鼠李糖发酵管 5ml 30 支/盒
蜜二糖发酵管 5ml 30 支/盒
苦杏仁甙发酵管 5ml 30 支/盒
西蒙氏柠檬酸盐琼脂 斜面 30 支/盒
结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂 90mm 10 个/包