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小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒操作步骤

2022-01-11

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒操作步骤:

1.         加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

2.         温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

3.         配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

4.         洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

5.         加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

6.         温育:操作同3。

7.         洗涤:操作同5。

8.         显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

9.         终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

10.     测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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