什么情况下需要使用同型对照?
? 做胞内流式实验,比如胞内细胞因子、趋化因子和信号蛋白等。
? 表面标志特异性不高或者不常见的:一些特异性不高的抗体,如多抗,非特异性结合非常多,使用同型对照可排除假阳性;因为不熟悉不常见标志的表达情况,根据同型对照可以判断阳性细胞的位置。
? 对流式非常熟悉,且检测的是CD3、CD4、CD19等表达强度非常高的标志,可以不使用同型对照。
为什么有时候同型对照的表达会比抗体的表达高?
首先需要检查同型对照是否加错类型、剂量等。其次,因为有些标志在细胞的表面或者胞内表达不高,而跟其类似的抗原非常多,那么加入同型对照时,同型对照非特异性的结合会超过抗体的特异性,所以会造成这种现象。这个时候推荐使用其他阴性对照,如空白对照等。