双孢菇三级种多以麦粒为原料，但在实际生产中发现污染率较高，或出现异常现象，导致生产计划难以落实，究其原因，就是菌种生产操作的不规范所致。现在，又到双孢菇三级种的生产时间，特提出具体规范操作技术，供菇农朋友参考。
1.原料处理：牛粪破碎处理后过筛，按1∶1.2加水拌匀，堆积发酵，每天翻堆一次，约20天左右，牛粪粉变为褐色、具有正常发酵草料的清香气味，晒干备用。无受潮的小麦，充分泡透后捞出，适当遮荫、通风，发现表皮发干时，轻喷细雾湿润，24小时即可发芽，待麦芽长至1~2厘米时，即可使用。
如果有虫蛀麦粒，也可使用，但虫蛀后的麦粒有孔洞，淀粉易流出，所以，必须多清洗几遍；然后倒入PH值8～9的石灰水中，浸泡6小时后煮20分钟左右，至麦粒无白心时，捞出麦粒，冷水冲洗后即可。
2.基本配方：麦粒（以干品计）100公斤，牛粪粉30公斤，石膏粉1公斤，碳酸钙1.5公斤。
3.基质混合：将麦粒与牛粪粉按1∶0.2比例混合，并同时拌入其它辅料，注意使牛粪全部粘附到麦粒上，水分不足时适量喷水。剩余牛粪粉待用。
4.装瓶操作：一般小批量生产多不采用标准瓶，而利用酒瓶、葡萄糖玻璃瓶等，装瓶灭菌。为降低生产成本，可用500毫升输液瓶。先装一把牛粪粉在瓶底，约1~1.5厘米厚，再装麦粒，装瓶时稍墩瓶，使麦粒至瓶肩以下1厘米处，然后，再装入1~2把牛粪粉，并用“L”形工具将之摊平、压死，之后塞入棉塞。
瓶内菌丝生长不健壮、呈散乱状态，或有“退菌”、“断菌”现象，料转色、结块或干缩，出现白色、浅黄色圆形块状物或不规则暗斑，有杂菌和螨类滋生，无蘑菇香味，具漂白粉或腥臭味等，均为不合格菌种。若菌丝呈淡黄白色，且菌丝萎缩，生长无力，或生长中就有菌被形成，则为培养基较湿或较老的菌种；菌种瓶内上部菌丝收缩变干，下部菌丝生长尚好，为培养基过干，培养温度过高；如果生长不均匀，表明麦粒浸泡和预煮时间不够；若生长中菌丝渐变黄，表明培养温度过高；若菌种瓶内上方出现很厚的菌被，是生产性能差或生理性状老化的菌种，不宜使用。一直在高温条件下培养的菌种，播种后不易吃料，发菌慢。
