温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。
如何获得良好线性的标准曲线？
按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，彻底收集粉末；确保标准品完全溶解和混匀（大约10min），然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且精确移液；显色的恰当终止；选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。
ELISA实验为什么必须设置复孔？
为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测。
因为复孔检测可以：
★计算平均值，确保实验结果更准确；
★解决实验中误操作造成的跳孔现象；
★计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。
为什么实验过程中孵育、洗涤需要振荡？如何振荡？
振荡孵育使反应更充分，振荡洗涤使背景更干净。建议使用酶标专用96孔微孔板振荡器。
孵育过程振荡，可以加快、加强抗原抗体分子间的相互碰撞接触，使得反应过程更加完全，OD值通常会比未振荡孵育的结果要高；洗涤过程振荡，可以使洗板更干净，在很大程度上能降低背景值，同时可以提高试剂盒检测的灵敏度。
